金 燕, 龙庆德， 常楚瑞， 陆平祝, 王晓丽

(贵州医科大学,贵州贵阳 550004)



黔产苦参ISSR-PCR反应体系正交优化研究

金 燕, 龙庆德， 常楚瑞*， 陆平祝, 王晓丽

(贵州医科大学,贵州贵阳 550004)

摘要[目的]确定适合苦参稳定的ISSR-PCR反应体系。[方法]采用经典的CTAB法提取苦参新鲜幼嫩叶片DNA；针对Mg2+、dNTPs、引物、模板DNA和Taq DNA聚合酶进行正交设计L16(45)，优化黔产苦参ISSR-PCR反应体系。[结果]最适ISSR-PCR反应体系为：模板DNA 90 ng、0.4 μmol/L 引物、2.0 mmol/L Mg2+、Taq DNA聚合酶0.5 U、0.5 mmol/L dNTPs。[结论]建立的苦参ISSR-PCR反应体系，经过19 份苦参样品检验，证明该体系稳定可靠，可用于苦参遗传多样性分析。

关键词苦参；CTAB；ISSR-PCR 反应体系；正交设计

苦参(Suphora flavercensAit.)为豆科槐属植物，是我国常用的传统中药，全国各地均有分布。临床研究证实，苦参中含有多种化学成分，具有广泛的药理作用[1-2]，其临床主要用来治疗寄生虫病、细菌性疾病、乳糜尿、哮喘、心率失常、慢性乙肝炎、肾小球肾炎、肝硬化腹水[3]、癌症、失眠症、躁狂症、皮肤病、妇科炎症(如痛经、白带、尿道炎)等。

近年来，随着分子生药学的推广，从分子水平上对中药材进行相关研究受到关注，方法也得以完善，为准确、科学地评价苦参种质资源提供了有利工具[4]。简单重复序列区间(ISSR)是1994年发展的一种基于微卫星系列的分子标记技术，用于检测简单重复序列(SSR)间DNA序列差异，具有不需要知道序列信息、简便、快捷、重复性好等特点，比随机扩增多态性DNA标记(RAPD)具有更高的可重复性和稳定性，该技术已经广泛应用于中药材遗传多样性与亲缘关系研究，并取得了较好的成效[5]。苦参的化学成分、提取工艺、药理、临床及农业应用等几个方面国内外的研究比较多[1-3]，苦参的分子生物学方面的研究还处于起步阶段。……