晁天柱， 徐福意， 徐　伟， 李　凯， 周宇荀， 肖君华

(东华大学 生物科学与技术研究所，上海 201620)



分离培养适用于染色体分选的新生小鼠皮肤成纤维细胞

晁天柱， 徐福意， 徐伟， 李凯， 周宇荀， 肖君华

(东华大学 生物科学与技术研究所，上海 201620)

摘要：采用酶消化法分离培养新生小鼠皮肤成纤维细胞(mouse skin fibroblasts, MSFs)．通过噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术(flow cytometry, FCM)，深入探讨不同培养基和血清浓度对MSFs增殖率和同步化效率的影响．结果表明：酶消化法能快速获取大量健康、高活力的MSFs；在杜氏培养液(DMEM)传代培养条件下，P2代MSFs具有高增殖率和有丝分裂指数；地美可辛工作浓度为0.05 μg/mL时，阻断同步化获取M期MSFs的效率最佳．研究结果为流式细胞术分选染色体提供实验材料和研究基础．

关键词：成纤维细胞； 噻唑蓝(MTT)； 细胞同步化； 流式细胞术

纯化的染色体可应用于物理作图[1-2]、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)[3-4]、构建DNA文库[5-6]、有丝分裂相关蛋白质[7-8]的研究和二代测序．染色体纯化和测序技术相结合能快速、高效地获取目标染色体的DNA序列信息[9]，并广泛应用于动植物个体，如小麦[10]、山羊草[11]、人[12]、小鼠[13]和仓鼠[14]等．在染色体纯化方法中，显微切割技术虽能获得高纯度染色体，但耗时、耗力，得率低[15]；磁珠分选法的纯度低，且染色体不完整[16]；而流式细胞术(FCM)是染色体纯化效率最高的方法[17]．

虽然各种细胞类型都能用于流式细胞术分选染色体[18]，但细胞的质量、稳定性和有丝分裂指数，严重影响单染色体悬液的质量和流式分辨率[19]．成纤维细胞在适当体……