贺云彦，李 诗，刘科赛，侯建军，刘细霞，李运涛

（湖北师范大学 食用野生植物保育与利用湖北省重点实验室，湖北 黄石 435002）

改良CTAB法用于水环境中超微型浮游生物总DNA的提取

贺云彦，李 诗，刘科赛，侯建军，刘细霞，李运涛*

（湖北师范大学 食用野生植物保育与利用湖北省重点实验室，湖北 黄石 435002）

水环境中超微型浮游生物的研究要求有高质量的总DNA。通过对常规的CTAB法进行改良，对提取过程中的几个关键步骤进行优化，包括联合使用CTAB和SDS，利用5×CTAB去除杂质等，建立一种可以高效提取水环境中超微型浮游生物总DNA的方法，并与常规CTAB法以及蛋白酶K法进行比较。改良后的CTAB法提取的DNA的产量、纯度均最高，也最适合后续的实验研究。

水环境；超微型浮游生物；改良CTAB法；DNA提取

近年来，很多学者致力于水环境中的浮游生物研究，其中超微型浮游生物的研究受到越来越多的的重视[1]。研究超微型浮游生物通常采用分子生物学方法，因而获得高质量的总DNA就成了后续研究的重要基础。超微型浮游生物因为粒径小，水样需提前过滤，导致样品起始量少，且样品细胞含有较多的环境杂质，给超微型浮游生物总DNA的提取带来了一定困难[2]。目前虽然已有一些水样及藻类总DNA的提取方法[3] [4],但这些方法不太适用于超微型浮游生物的研究，提取DNA的效果不佳。因此迫切需要一种更简便、高效、经济的提取方法。

1　材料与方法

1.1 材料

先用筛绢过滤除去水样中的泥沙等大型颗粒杂物，再用5μm Isopore滤膜进行初次过滤，然后用GF/F滤膜将初次过滤的水样进行二次过滤。……