季晓宇　鞠晓梅　汤　贺　姜　萌　罗来鹏　刘宇轩　侯毅鞠



A549细胞冻存与复苏方法的改进

季晓宇鞠晓梅汤贺姜萌罗来鹏刘宇轩侯毅鞠

吉林医药学院检验学院

季晓宇（1995-）女（汉族），河北省保定市人，在读本科；通讯作者：侯毅鞠（1974-）女（汉族），吉林省吉林市人，副教授，硕士学位，主要从事血液肿瘤相关的研究工作。

行业曲线

起始于20世纪早期的细胞培养技术作为生命科学研究最基础的环节，随着分子生物学实验技术的发展，在生物学研究领域得到了广泛应用，如培养肿瘤细胞是研发抗肿瘤新药的常规技术 。A549是1972年由Giard DJ通过肺癌组织移植培养建系的一种肺癌细胞。我们以A549细胞为例，研究细胞培养中最基本但又很关键的冻存与复苏的方法和条件，使A549冻存复苏后获得最高生物学特性，推动后期实验顺利进行。

实验所需材料与方法

实验材料

A549肺癌细胞，RPMI-1640培养基（GIBCO公司），胎牛血清（四季青），DMSO（北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司），胰蛋白酶（北京鼎国生物技术有限公司），CO2培养箱，倒置显微镜，超净工作台。

实验方法

A549细胞的培养及传代

在温度为37℃±1、CO2浓度为5%培养箱内，用胎牛血清为10%的RPMI-1640培养基进行培养，待细胞生长至80%～90%即可传代培养：弃去培养液后加入适量胰酶，37℃消化1～2 min，见有细小白沙状物顺瓶底滑脱，显微镜下观察到大部分细胞呈现圆形，细胞间隙增大后，立即加入完全培养液终止消化，收集细胞悬液，800 r·min-1，5min离心，去掉上清，加入10%胎牛血清的RPMI-1640培养基以后吹打混匀，按照1∶2进行传代培养。……