崔玉花，田莉莉，王晓亮，姜海蓉，范伟兴，彭方毅



基于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法的建立

崔玉花1,2，田莉莉2，王晓亮3，姜海蓉1，范伟兴2，彭方毅4

1.重庆理工大学药学与生物工程学院，重庆400054；2.中国动物卫生与流行病学中心，青岛266110；3.宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心，宁夏750000；4.重庆市垫江县中医院，重庆408300

摘要：目的本文建立一种基于样品检测的特异性好、灵敏性高的布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法。方法以哺乳动物beta-actin基因和外源重组质粒为内参，针对布鲁氏菌属特异性基因IS711，建立用于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法，并验证其敏感性、特异性及稳定性，绘制标准曲线。将该方法用于哺乳动物样品检测，并与细菌分离培养检测结果比较。结果荧光定量PCR方法对布鲁氏菌检测有良好的特异性，3对引物对阴性对照菌均无非特异性扩增；该方法用于样品检测的最低检测限为17拷贝；内外源内参同时存在条件下，布鲁氏菌荧光定量PCR的标准曲线相关系数为R2=0.997(Y=-3.12X+40.9)。将该方法直接用于181份动物样本的检测，并与分离培养结果相比，荧光定量PCR检测阳性率为11.4%，细菌分离培养检测阳性率为9.9%，且细菌分离培养阳性样品与荧光定量PCR阳性样品中编号基本一致。结论本文建立的荧光定量PCR检测方法灵敏性高、特异性及稳定性好，可直接应用于样品的检测，检测结果受内参基因质控。

关键词：布鲁氏菌；荧光定量PCR；外源内参；内源内参

布鲁氏菌病是由革兰阴性菌布鲁氏菌引起的一种全球性人兽共患病[1]。……