陈　鑫，韩　霜，臧素纲，杨萍灿，汪晓莺，周玉贵*

(1.南通大学附属东台医院 检验科,江苏 东台224200;2.南通大学医学院 免疫教研室，江苏 南通226001)



实时荧光定量PCR检测血清miR-7方法的建立及临床初步应用

陈鑫1，韩霜1，臧素纲1，杨萍灿1，汪晓莺2，周玉贵1*

(1.南通大学附属东台医院 检验科,江苏 东台224200;2.南通大学医学院 免疫教研室，江苏 南通226001)

摘要：目的建立ploy(A)聚合酶加尾的SYBR Green I 实时荧光定量PCR方法检测血清miR-7，并作临床初步应用。方法用Trizol试剂提取血清总RNA。miR-7 ploy(A)聚合酶加尾逆转录获得cDNA，进行SYBR Green I实时定量PCR扩增检测。制作C.elegans-miR-39模拟物浓度梯度稀释的标准曲线，绝对定量血清中miR-7的表达水平。结果该方法能定量检测血清miR-7表达水平，熔解曲线呈单峰，PCR扩增产物特异，在103copies/uL至106copies/uL范围内有良好的线性关系(r2=0.995)，并且检测重复性好。糖尿病患者血清中miR-7表达水平明显高于健康体检者(P<0.05)。结论所建立的ploy(A)聚合酶加尾SYBR Green I 实时荧光定量PCR方法能敏感、特异地检测血清中miR-7的表达水平，为下一步临床应用的研究奠定了方法学基础。

关键词：SYBR Green I实时荧光定量PCR；miR-7；糖尿病

(Chin J Lab Diagn,2016,20:0959)

microRNAs(miRNAs)是近年来研究发现的一类分布广泛的小分子RNA。它们基于与靶mRNA的序列互补配对结合，可以降解靶mRNA或抑制蛋白质翻译。作为一种新型基因表达调控因子，miRNAs参与生命过程中一系列的重要生物学进程，包括个体发育、器官形成、干细胞分化、细胞增殖、细胞凋亡等[1-3]。随着研究的不断深入，miRNAs与疾病之间的关系也趋于明朗化，已成为目前临床应用研究的热点内容。有报道表明，miR-7是胰岛组织内表达最丰富的内分泌miRNA[4]，参与胰岛的发育和胰岛素合成，提示其在糖尿病的发病机制中可能扮演重要角色。因此，血清miR-7表达水平的检测是其临床应用研究首当其冲需解决的问题。……