董宁远，张阁元，徐沙，高晓冬

(江南大学 生物工程学院，糖化学与生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡，214122)



来源于胞曲霉的α-1,2-甘露糖苷酶在酿酒酵母Δalg3Δoch1Δmnn1菌株中的定位表达

董宁远，张阁元，徐沙，高晓冬*

(江南大学 生物工程学院，糖化学与生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡，214122)

摘要利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)生产医药糖蛋白，必须对其N-糖基化途径进行人源化改造。在敲除酿酒酵母W303A特异性糖基化基因ALG3、OCH1和MNN1后，表达来源于胞曲霉(Aspergillus saitoi)的α-1,2-甘露糖苷酶(MsdSp)进一步改造酿酒酵母N-糖链。通过在MsdSp的C-端添加内质网滞留信号(HDEL)和构建高尔基体滞留信号Kre2p与MsdSp的嵌合体蛋白实现MsdSp在内质网和高尔基体中的定位表达。结果表明，各突变株中均检测到Man3GlcNAc2和Man4GlcNAc2型N-糖链，并且在强启动子酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(GPD)控制下，内质网定位表达MsdSp的菌株KM201中，Man3GlcNAc2和Man4GlcNAc2型N-糖链含量较多。该研究为酿酒酵母N-聚糖进一步人源化改造提供依据。

关键词酿酒酵母；人源化；N-糖链结构；细胞定位

N-糖基化是蛋白质翻译后修饰的一种重要方式[1]，糖链对蛋白质的生物活性、稳定性，分子间的相互识别，特定的免疫反应以及糖蛋白药物的半衰期等方面都有重要的影响[2-3]。目前已有多种糖蛋白药物被批准用于治疗人类疾病[4]。迄今为止，生产医药糖蛋白的主要途径是哺乳动物细胞培养(如中国仓鼠卵巢细胞系CHO、人类胚胎肾细胞HEK等)。哺乳动物细胞株的优势在于其重组蛋白的糖基化形式为复合型、杂合型，与人类相似。但是，基因操作复杂、外源基因不能精确定位、生产成本高等问题限制了哺乳动物表达体系的应用和发展[5]。……