洪建明，冼中任，曾林玉，徐　霞

(广州医科大学金域检验学院　510182)

基于抗体-适配子建立的高尔基体蛋白73检测方法的研究

洪建明，冼中任，曾林玉，徐霞

(广州医科大学金域检验学院510182)

目的建立基于抗体-适配子双夹心的高尔基体蛋白73(GP73)ELISA检测方法，并用于血清GP73的检测。方法以抗体-适配子双夹心的模式，通过正交试验和方阵滴定试验确定GP73特异性抗体和适配子最佳工作水平、反应的温度和时间等。以GP73 重组蛋白建立标准曲线并评价该方法灵敏度、精确度、线性及准确度等。利用该方法对59例对照组患者及77 例肝癌患者血清进行GP73水平检测，并同步进行电化学发光定量测定甲胎蛋白(AFP)水平。结果该方法标准曲线的批内变异系数(CV)为3.87%，批间CV平均为4.44%；平均回收率为95.8%，灵敏度达12.0 ng/mL。肝癌患者血清GP73水平均明显高于对照组、肝炎组和肝硬化组(P<0.05)。GP73对原发性肝癌诊断灵敏度为85.7%，而AFP为62.3%；而早期肝癌中GP73和AFP灵敏度分别为76.7%、36.7%。结论成功建立基于抗体-适配子夹心的GP73 ELISA 检测方法，该方法可用于临床检测GP73水平。

高尔基体蛋白73;适配子;酶联免疫吸附试验;肝癌

高尔基体蛋白73(GP73)是相对分子质量约为73×103的Ⅱ型跨膜糖蛋白，在健康人肝脏中表达甚微或不表达[1]；但研究发现其在肝癌细胞中表达明显升高，GP73被认为是肝癌诊断的新型标志物[2]。近年来的研究更是表明,GP73诊断原发性肝癌的灵敏度可达77.0%～88.6%，明显优于甲胎蛋白(AFP)的40.0%～62.9%；特别是在AFP阴性原发性肝癌的诊断中GP73更具优势[3-5]。在以往的研究中，免疫印迹试验和ELISA两种方法最常用于GP73蛋白水平的检测。其中免疫印迹试验由于操作步骤繁多，且仅用蛋白水平半定量，无法在临床应用推广；ELISA中的单抗、多抗的制备时间周期长，过程复杂，纯度要求高，难以控制,且抗体的修饰困难，长期保存难等限制了其临床应用。……