4种水产药物对褐鳟(Salmo trutta)鱼苗的急性毒性试验

2016-07-14王万良周建设王建银潘瑛子陈美群扎西拉姆李宝海

西北农业学报 2016年7期

关键词：敌百虫硫酸亚铁高锰酸钾

王万良，周建设，王建银，张　弛，潘瑛子，陈美群，扎西拉姆，李宝海

(1.西藏自治区农牧科学院水产科学研究所，拉萨　850032；2.西藏自治区农牧科学院，拉萨　850032)

4种水产药物对褐鳟(Salmo trutta)鱼苗的急性毒性试验

王万良1，周建设1，王建银2，张弛1，潘瑛子1，陈美群1，扎西拉姆1，李宝海2

(1.西藏自治区农牧科学院水产科学研究所，拉萨850032；2.西藏自治区农牧科学院，拉萨850032)

为研究实际生产过程中褐鳟鱼苗阶段水产药物的安全使用剂量，选择在静水条件下，水温控制在(9±0.5) ℃，用高锰酸钾、硫酸铜与硫酸亚铁合剂、甲醛和敌百虫对褐鳟鱼苗进行急性毒性试验。结果表明，24、48 h褐鳟对4种药物的敏感性依次为高锰酸钾>硫酸亚铁和硫酸铜合剂>敌百虫>甲醛，安全质量浓度分别为0.18、0.35、0.45和25.88 mg/L。因此，在褐鳟鱼苗培育过程中，做到严格诊断，疾病预防及治疗中对症下药，细菌性疾病严格控制高锰酸钾安全使用剂量；病毒性疾病建议使用甲醛；寄生虫病建议使用敌百虫，硫酸铜与硫酸亚铁合剂慎用。

褐鳟；急性毒性；半致死质量浓度；安全质量浓度；敏感性

褐鳟(Salmotrutta)又称棕鳟，与亚东鲑同物异名，隶属于鲑形目(Salmoniformes)鲑科(Salmonidae)鲑亚科(Salmoninae)，主要分布在亚洲、非洲和欧洲，中国仅分布在西藏日喀则市，是英国人于1866年自欧洲引种到亚东县，已成为一个地方性自然种群，1992年被列为自治区二级重点水生野生保护动物[1-8]。褐鳟肉质细嫩鲜美、营养丰富，深受广大群众的喜爱。目前在当地市场每千克200～300元，具有很高的经济价值。

褐鳟养殖是亚东县的四大特色优势产业之一，人工繁殖技术已基本成熟，初步形成一定养殖规模[9]。近几年，西藏完善的交通运输业推动褐鳟养殖产业的快速发展，消费市场不断扩展，褐鳟市场需求空间增大，同时褐鳟发病率也日趋增多，尤其在鱼苗阶段死亡率较高，给广大养殖户造成不必要的财产损失。

褐鳟鱼苗在其整个养殖过程中是一个很关键的阶段，做好消毒工作对预防疾病发生具有重要的作用。因此，在褐鳟鱼苗培育阶段，选择渔药及控制其剂量对褐鳟鱼苗疾病预防及健康培育具有深远的意义。目前，有关鱼类急性毒性试验方面的研究主要在四大家鱼、部分观赏鱼、大口鲶、云斑鮰、斑点叉尾鮰及牙鲆等[10-16]，而对褐鳟急性毒性试验的相关研究还未见报道。本文通过对褐鳟鱼苗的急性毒性试验，旨在为当地人工养殖提供参考。

1材料与方法

1.1试验材料

试验材料由黑龙江水产研究所提供发眼卵，在西藏农牧科学院国家级现代农业园区水产养殖基地孵化及培育，选择身体健壮、规格整齐、游泳活泼、摄食良好的褐鳟鱼苗3 500尾作为试验样本，体长28.1～34.4 mm，平均体长31.3 mm，体质量0.146～0.198 g，平均体质量0.189 g。试验前将鱼放在水族箱中暂养72 h以降低应激反应，同时停止投喂饵料，保持溶氧5.5 mg/L以上。

1.2试验药物

在鱼类鱼苗培育过程中，常用水产药物主要有高锰酸钾、硫酸铜和硫酸亚铁合剂、甲醛和敌百虫。

参试药物详情见表1。

表1　试验药物规格及生产厂家

1.3试验条件

试验在西藏拉萨国家级现代农业园区水产养殖基地进行。试验用水为经过曝气的地下水，水温控制在(9±0.5) ℃，pH为7.8，采用曝气增氧，溶氧保持在5.5 mg/L以上，在容积为50 cm×40 cm×40 cm的透明玻璃钢内进行试验。为减少外界干扰，整个试验在弱光、恒温的实验室进行。

1.4试验方法

首先进行预备试验，测出死亡率为0的最高药物质量浓度(一般为96 h)和死亡率为100%的最低药物质量浓度(一般为24 h)；其次,按等对数间距设计5个质量浓度，每个质量浓度设3个平行组，另设1个空白对照组，同时对易降解或具有挥发性的药品(高锰酸钾和甲醛)每隔24 h换药液1次，以保证试验药物的质量浓度；再次,在每个玻璃钢放鱼苗30尾，进行12 h连续观察其中毒症状表现，判断死亡的标准是用镊子夹鱼的尾部，放入清水中没有任何反应，可认为已经死亡，同时清理出水中的排泄物；最后在静水中进行试验，统计24、48、72和96 h各质量浓度的死亡率。各药物质量浓度见表2。

表2　药物质量浓度

统计各质量浓度梯度在不同时间段鱼苗的死亡率，用直线内插法求出24、48、72和96 h的半致死质量浓度(LC50)[10]，计算公式：LC50=C1+(50%-P1)×(C2-C1)/(P2-P1)，C1、C2为存活率接近50%的两端质量浓度，P1、P2为相应存活率。安全质量浓度(SC)计算公式[10]：SC=LC50(48 h)×0.3/[LC50(24 h)/LC50(48 h)]2。

2结果与分析

2.1高锰酸钾急性毒性试验

由表3可知，高锰酸钾质量浓度为1.32 mg/L 时，幼鱼进入试液后先快速游泳，呼吸频率加快，17 min后慢慢恢复平静，7.42 h开始中毒死鱼，死鱼体表粘液增多，嘴和鳃盖均张开，24 h死亡率为100%；质量浓度为1.05 mg/L 时，10.33 h开始中毒死鱼，濒临死亡的鱼呼吸缓慢，游泳异常，死后身体僵硬，24 h死亡率为43.3%，48 h死亡率为100%；质量浓度为0.83 mg/L 时，24、48、72、96 h的死亡率分别为26.7%、30.0%、56.7%和73.3%；质量浓度为0.66 mg/L 时，24、48、72、96 h的死亡率分别为0、18.0%、20.0%和23.3%；质量浓度为0.56 mg/L 时， 24、48、72、96 h的死亡率全部为0；对照组质量浓度为0 mg/L 时， 24、48、72、96 h的死亡率全部为0。

表3　高锰酸钾急性毒性试验死亡率

2.2硫酸铜与硫酸亚铁合剂(5∶2)急性毒性试验

由表4可知，硫酸铜与硫酸亚铁合剂质量浓度为8.42 mg/L 时，幼鱼进入试液后先快速游泳，呼吸频率加快，20 min后慢慢恢复平静，5.42 h开始中毒死鱼，死亡鱼体僵硬，嘴和鳃盖均张开，24 h死亡率为100%；质量浓度为4.07 mg/L 时，幼鱼进入试液后先快速游泳，呼吸频率加快，15 min后慢慢恢复平静，7.75 h开始中毒死鱼，死亡鱼体发黑，体表粘液增多，并有白色絮状附着物，24、48 h死亡率为分别为80%和95%，72、96 h死亡率均为0；质量浓度为2.29 mg/L 时，24、48、72、96 h的死亡率分别为50.0%、73.3%、83.3%和86.7%；质量浓度为1.23 mg/L 时，24、48、72、96 h的死亡率分别为13. 3%、20.0%、23.3%和26.7%；质量浓度为0.66 mg/L 时，24、48、72、96 h的死亡率均为0；对照组质量浓度为0 mg/L 时， 24、48、72、96 h的死亡率全部为0。

表4　硫酸铜与硫酸亚铁合剂急性毒性试验死亡率

2.3甲醛急性毒性试验

由表5可知，甲醛质量浓度为154.0 mg/L 时，幼鱼进入试液后先快速游泳，呼吸频率加快，35 min后慢慢恢复平静，1.42 h开始中毒死鱼，死亡前呼吸缓慢，游泳异常，最后沉于水底死亡，体表粘液增多。24 h死亡率为100%；质量浓度为109.6 mg/L时，2.75 h开始中毒死鱼，死后鱼体僵硬，鳃盖和嘴均张开，24、48、72、96 h死亡率分别为26.7%、53.3%、83.3%和100%；质量浓度为75.9 mg/L 时，24、48、72、96 h的死亡率分别为6.7%、20.0%、30.0%和36.7%；质量浓度为52.5 mg/L 时，24、48、72、96 h的死亡率分别为0、13.3%、16.7%和16.7%；质量浓度为36.0 mg/L 时，24、48、72 h的死亡率均为0，96 h的死亡率为3.3 ﹪；对照组质量浓度为0 mg/L 时，24、48、72、96 h的死亡率全部为0。

2.4敌百虫急性毒性试验

由表6可知，晶体敌百虫质量浓度为4.98 mg/L时，幼鱼进入试液后先快速游泳，呼吸频率加快，0.23 h后慢慢恢复平静，4.83 h开始中毒死鱼，临死前呼吸缓慢，失去知觉，体色发白，粘液增多，24 h死亡率为100%；质量浓度为3.16 mg/L时，24、48、72 h的死亡率为分别为56.7%、83.3%和95.0%，96 h死亡率为100%；质量浓度为2.00 mg/L时，24、48、72、96 h的死亡率分别为40.0%、50.0%、73.3%和73.3%；质量浓度为1.26 mg/L时，24、48、72、96 h的死亡率分别为16.7%、30.0 %、40.0%和43.3%；质量浓度为0.78 mg/L时，24、48、72 h的死亡率均为0，96 h的死亡率为6.7%；对照组质量浓度为0 mg/L时， 24、48、72、96 h的死亡率全部为0。

表5　甲醛急性毒性试验死亡率

表6　敌百虫急性毒性试验死亡率

2.5各药物质量浓度下半致死质量浓度及安全质量浓度

从表7可以看出，在静水条件下，24和48 h 4种药物对褐鳟鱼苗的半致死质量浓度毒性顺序为甲醛>敌百虫>硫酸亚铁和硫酸铜合剂>高锰酸钾；72和96 h半致死质量浓度毒性顺序为甲醛>硫酸亚铁和硫酸铜合剂>敌百虫>高锰酸钾；根据有毒物质对鱼类毒性标准，剧毒<1 mg/L，中等毒性1～10 mg/L，低毒>10 mg/L，以48 h半致死质量浓度为例，高锰酸钾属于剧毒，硫酸铜和硫酸亚铁合剂、敌百虫为中等毒性，甲醛为低毒渔药。从安全质量浓度来看，褐鳟对渔药的敏感度顺序为高锰酸钾>硫酸铜与硫酸亚铁合剂>敌百虫>甲醛。

表7　试验药物对褐鳟鱼苗的安全质量浓度

3讨论

3.1高锰酸钾对褐鳟的急性毒性作用

鲑鳟鱼类内脏真菌病国外有多次报道，国外学者分别于20世纪40年代和70年代报道发生于美国及日本歧阜县的2种水霉属真菌引起的内脏真菌病，随着中国鲑鳟鱼养殖业的迅猛发展，该病也在部分地区发生[17]。高锰酸钾作为一种常用水产药物，因其具有强氧化性，可促使细菌或其他有机物立即放出新生态氧，通过氧化细菌体内的活性基因而发挥杀灭细菌的作用，对杀灭原虫类、单殖吸虫类和锚头蚤等鱼类寄生虫有显著效果，是毒性小、副作用小、用量小的传统消毒剂。在渔业生产中，高锰酸钾用于鱼类及其附属设施设备消毒，但西藏地下水为天然弱碱性水，高锰酸钾溶液产生二氧化锰沉淀，对鱼鳃具有破坏作用，容易导致鱼类缺氧而死；一般使用剂量为 2～5 mg/L，高锰酸钾对褐鳟鱼苗的安全质量浓度为0.18 mg/L，远低于常用消毒质量浓度，与虹鳟鱼类(0.217 mg/L)和长薄鳅鱼苗(0.38 mg/L)接近，低于金鱼(0.80 mg/L)和黄颡鱼(1.11 mg/L)[18-19]。因此，用高锰酸钾对褐鳟鱼苗消毒和进行真菌感染治疗时要注意使用剂量。

3.2硫酸铜与硫酸亚铁合剂对褐鳟的急性毒性作用

车轮虫和小瓜虫是典型的鲑鳟鱼类寄生虫性疾病，常引起患病鱼急躁不安，呼吸困难，食欲减退，大批死亡。硫酸铜与硫酸亚铁合剂(5∶2)为鱼病防治中经常使用药物之一，当质量浓度为0.5～0.7 mg/L时，可防治鳃隐鞭虫、口丝虫、车轮虫、斜管虫、毛管虫和中华鳋等病，也可用于杀灭鱼池中青泥苔、水网藻、蓝绿藻，以及池中的椎实螺。在食场挂袋，可用于防治寄素性鳃病和皮肤病。本试验结果表明，硫酸铜与硫酸亚铁合剂对褐鳟鱼苗为0.35 mg/L，低于生产常用质量浓度，远高于长吻鮠安全质量浓度而低于斑点叉尾鮰安全质量浓度(0.85 mg/L)，与梭鲈鱼的安全质量浓度(0.48 mg/L)较为接近[19-20]。所以，在培育褐鳟鱼苗寄生虫性疾病预防与治疗中，考虑到硫酸铜与硫酸亚铁合剂属于重金属离子，不仅可以在鱼体内蓄积，而且对环境污染危害比较严重，所以不建议长期使用或使用时严格控制剂量。

3.3甲醛对褐鳟的急性毒性作用

传染性胰腺坏死病毒病(IPNV)是威胁鲑鳟鱼类最主要的病毒性疾病之一，主要危害14～70日龄的鱼苗、鱼种，在水温10～12 ℃，死亡率可高达80%～100%，鱼越小死亡率越高。甲醛是一种无色的有强烈剌激性气味的气体，已被世界卫生组织确定为致癌和致畸形物质，φ(甲醛)为35%～40%的水溶液被称为福尔马林。甲醛被广泛应用于工农业生产，在水产上应用，主要因为其具有防腐，杀菌和杀虫作用，甲醛可以和生物体(包括细菌)本身的蛋白质上的氨基发生反应。甲醛对褐鳟鱼苗安全质量浓度为25.89 mg/L，在日常生产范围之内(10～30 mg/L)，远高于厚颌鲂鱼苗(7.50 mg/L)、丁鱥(7.50 mg/L)、长吻鮠(6.6 mg/L)和斑点叉尾鮰(6.0 mg/L)的安全质量浓度[20-21]。因此，甲醛相对耐受度比厚颌鲂鱼苗、丁鱥、长吻鮠和斑点叉尾鮰要强，在褐鳟鱼苗病毒性疾病防治及治疗中，建议使用甲醛。

3.4敌百虫对褐鳟的急性毒性作用

单殖吸虫对中国淡水养殖鱼类的危害，主要有三代虫和指环虫二属种类所引起的鳃病和皮肤病。敌百虫为白色结晶体，稍有臭味，易溶于水，是一种高效低毒的有机磷杀虫剂。在鱼类生产中，只能用于防治寄生虫性鱼病，对细菌性病毒性鱼病无效，所以在使用药物之前应对疾病进行严格诊断，然后对症下药。当使用剂量为0.3～0.5 mg/L，可防治指环虫、松藻虫、中华骚、锚头鳋等。在鱼类生产中，敌百虫对鳜、鲈、浅水鲳和虾类较为敏感，使用安全剂量也可导致鱼类死亡[22]。本试验中，敌百虫对褐鳟使用安全质量浓度为0.45 mg/L，高于黑尾近红鲌鱼苗安全质量浓度(0.25 mg/L)，远远低于金鱼安全质量浓度(2.76 mg/L)。因此，褐鳟在防止单殖吸虫等寄生虫病时，可选择使用安全剂量的敌百虫。

4结论

药物使用过程中半致死质量浓度(LC50)可以衡量毒性大小，本研究结果表明，褐鳟对4种药物的敏感性依次为：24和48 h，高锰酸钾>硫酸亚铁和硫酸铜合剂>敌百虫>甲醛；72和96 h，高锰酸钾>敌百虫>硫酸亚铁和硫酸铜合剂>甲醛；根据中华人民共和国环境保护行业标准《新化学物质危害评估导则》规定，对褐鳟鱼苗高锰酸钾属于剧毒，硫酸铜和硫酸亚铁合剂、敌百虫属于中等毒性，甲醛属于低毒。因此，在褐鳟鱼苗培育过程中，做到严格诊断，疾病预防及治疗中对症下药，细菌性疾病严格控制高锰酸钾安全使用剂量；病毒性疾病建议使用甲醛；寄生虫病建议使用敌百虫，硫酸铜与硫酸亚铁合剂慎用。

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Acute Toxicity of Four Aquacultural Drugs toSalmotrutta

WANG Wanliang1, ZHOU Jianshe1,WANG Jianyin2, ZHANG Chi1, PAN Yingzi1,CHEN Meiqun1, ZHAXILAMU1and LI Baohai2

(1.Institute of Aquaculture of Tibet Academy of Agricultural and Animal Husbandry Sciences, Lasa850032,China;2.Tibet Academy of Agricultural and Animal Husbandry Sciences, Lasa850032,China)

In order to study the safe use of aquatic medicines forSalmotruttaat stage of fry during the actual production process. Under condition of still water, water temperature was controlled bewteen (9±0.5) ℃, acute toxicity of four aquacultural drugs toSalmotruttawas conducted with potassium permanganate, copper sulfate and ferrous sulfate, formaldehyde and trichlorphon for.The results showed after 24 h and 48 h, order of sensitivities of four drugs toSalmotruttawas, potassium permanganate>copper sulfate and ferrous sulfate>formaldehyde>trichlorphon, safety mass concentrations were 0.18 mg/L,0.35 mg/L,0.45 mg/L,25.88 mg/L,respectively.Therefore, in process of seedlings cultivation ofSalmotrutta,we must diagnose strictly, apply medicine according to indications to prevent and treat .In bacterial disease, we must control potassium permanganate dosage strictly and safely;we suggest using formaldehyde in viral disease;recommend to use trichlorfon, copper sulfate and ferrous sulfate mixture cautiously in parasitic diseases .

Salmotrutta; Acute toxicity; Lethal mass concentration;Safety mass concentration;Sensitivity

2016-03-01

2016-04-05

Ministry of Agriculture, the Projects of Introduction of International Advanced Agricultural Science and Technology(No.2014-Z57).

WANG Wanliang,male,master student.Research area:protection and utilization of indigenous fishes in Tibet.E-mail:qlxlsylzfyzx@163.com

LI Baohai, male, research fellow，doctoral supervisor.Research area:protection and utilization of indigenous fishes in Tibet.E-mail:lbh0891@163.com

(责任编辑：顾玉兰Responsible editor:GU Yulan)

2016-03-01修回日期：2016-04-05

农业部引进国际先进农业科学技术项目(2014-Z57)。

王万良，男，硕士，研究方向为西藏鱼类资源开发与保护利用。E-mail：qlxlsylzfyzx@163.com

李宝海，男,研究员，博士生导师，研究方向为西藏土著鱼类开发与保护利用。E-mail：lbh0891@163.com

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