高 岩王晓羽（ 盘锦检验检测中心理化科，辽宁 盘锦 400； 辽宁汉草堂中药有限公司质量授权人，辽宁 营口 5004）



白术和苍术的鉴定研究

高 岩1王晓羽2
（1 盘锦检验检测中心理化科，辽宁 盘锦 124010；2 辽宁汉草堂中药有限公司质量授权人，辽宁 营口 115004）

【摘要】目的 探讨白术和苍术的鉴定。方法 本研究采用ITS2序列对药材白术与苍术进行DNA条形码鉴定。结果 白术与苍术的3个基原物种（苍术、关苍术和朝鲜苍术）ITS2序列均为229 bp。13条白术的序列仅在98 bp处有C-G变异，平均CG含量为69.42%；3条苍术序列无变异位点；关苍术与朝鲜苍术的种内最大K2P距离均为0.013。白术、朝鲜苍术序列能各自聚为一支，关苍术与苍术聚为一支。结论 ITS2序列在药材白术与苍术鉴定方具有很好的鉴别效果。

【关键词】白术；苍术；鉴定

苍术、白术是临床上重要的常用中药。苍术、白术均为菊科苍术属Atractylodes DC.植物，二者的名称、功效、临床应用均较相似，极易混淆。白术、苍术、关苍术、朝鲜苍术的来源较多，且较复杂。2010年版《中国药典》规定，白术、苍术的药用植物均为菊科植物，其中苍术又包含茅苍术或北苍术，北苍术又包括了关苍术和朝鲜苍术。四种药材的药用部位均是其干燥根茎［1］。

DNA条形码鉴定技术一提出因其通用、快捷等优势得到了广泛的关注。药材羌活、冬虫夏草、党参等药材及其混伪品的鉴定中DNA条形码鉴定技术发挥了很大作用。此外DNA条形码鉴定技术应用在植物的检验检疫、药材市场监督以及法医鉴定等诸多方面。为了确保白术与苍术的用药质量，运用DNA条形码技术鉴定白术与苍术，更好的服务于临床。

1 材料与方法

1.1 材料：本研究收集大量的基原植物及药材包括白术、苍术、关苍术、朝鲜苍术。所有样本鉴定均由权威部门中国医学科学院的药用植物研究所执行。白术Atractylodes macrocephala，样本数13，样本编号YC0059MT01～YC0059MT13，产地为河北省安国；苍术A. Lancea，样本数5，样品编号YC0161MT01～YC0161MT05，产地河南省洛阳；关苍术A. Japonica，样本数4，样品编号YC0062MT01～YC0062MT04，产地吉林省长白山；朝鲜苍术A. Coreana，样本数7，样品编号YC0061MU01～YC0061MU09，产地辽宁省沈阳。

1.2 方法：将药材去掉表皮留取中间部分为药材样本，取样本约40～60 mg。然后用高通量组织球磨仪研磨组织2 min，频率为50 Hz，核分离液洗涤，800微升/次，洗涤3次后，留取沉淀，采用植物组织DNA提取试剂盒提取样本药材的DNA。

PCR扩增：ITS2正向引物ITS2F （5'AT-GCGATACTTGGTGTGAAT-3'），反向引物ITS3R （5'-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3'），反应体系25 µL，正反向引物各1 µL，DNA模板2～3 µL，其余体积以ddH2O补充［2］。

2 结 果

2.1 DNA提取及PCR扩增效率：本实验提取DNA采用的是核分离液洗

组8例有效，2例死于肾功能衰竭，l例死于肝性脑病，l例死于上消化道出血。

涤技术，在试验过程中存在在细胞核中的多酚、多糖可以被除去，提高DNA纯度。29份样本均成功提取DNA。结果发现引物ITS2F/3 R对本研究中白术、苍术、关苍术、朝鲜苍术4种药材及基原植物均有较高的扩增效率，通过试验得到质量较高的ITS2序列。

2.2 种内、种间变异分析：13条白术的序列中，ITS2序列长度为229 bp，仅在98 bp处有C-G变异，平均CG含量在4个物种中最高，为69.42%，种内最大K2P距离为0。药材苍术的3个基原物种中，CG含量分别为。4条苍术序69.00%、68.27%、68.67%。4条苍术序列在本试验中未发现变异，种内最大K2P距离为0。见表1。

3 讨 论

白术、苍术是常用的药材，具有悠久的应用历史。白、苍二术，《神农本草经》称“术”，列为上品，但未有白术和苍术之分。张建逵等［3］查阅大量本草文献、充分考证后认为：唐代蔺道人明确区别苍术、白术。找到白术与苍术的鉴别，更好的控制两药的质量。北苍术是一种较为混杂的物种，在《中国植物志》中就有着明确的记载，其中主要包括苍术本种，以及一些生长在北方地区的苍术种类。如：关苍术组要生长在辽宁以及山东地区，其中朝鲜苍术也被包括在其中。本研究中关苍术与苍术的最小种间K2P距离为0.10，小于关苍术最大种内K2P距离0.013，该结果与《Flora of China》中的分类一致。通过对苍术、关苍术、朝鲜苍术的ITS2序列特征及种间遗传距离的比较，表明ITS2序列在苍术、关苍术、朝鲜苍术鉴别中较好。白术与苍术有多种鉴定方式，近年来随着薄层色谱的方法的快速发展，传统的通过观察二者的性状、粉末显微特征的方法逐渐被取代［4］。本研究采用的是近年来新兴的方法DNA条形码鉴定技术。本研究样本药材白术和苍术的鉴定序列均为223～229 bp，ITS2序列较短。本实验研究的13条白术序列中，所有峰图在98 bp饰处均为CG套峰状况，由此推断，98 bp饰处为白术ITS2序列中的一个SNP位点。综上所述，ITS2序列在药材白术、苍术、关苍术、朝鲜苍术鉴定中取得了较好的效果，充分说明DNA条形码分子鉴定技术在药物鉴定中的有效应用。研究药材的鉴定有助于辨别药材真伪，同时也可指导临床精确用药。

表1 白术、苍术ITS2序列特征及种间遗传距离

参考文献

［1］ 中国科学院中国植物志编委会.中国植物志［M］.北京：科学出版社，1987.

［2］ 陈士林.中药DNA条形码分子鉴定山［M］北京：人民卫生出版社，2012：22.

［3］ 张建逵，窦德强，王冰，等.白术的本草考证［J］.时珍国医国药，2013，24（9）：2222.

［4］ 傅厚道.白术及其伪品的鉴别［J］.中国药业，2012，21（18） ：92.

3 讨 论

肝肾综合征（HRS）是肝硬化功能性肾损害，肾脏并无解剖和组织学方面的病变［2］。具体发病机制非常复杂，与肾脏神经、体液调节异常、血液循环功能障碍、心脏病变和肝功能损害、门静脉高压等多种因素相关［3］，以动脉循环和内源性血管活性系统显著异常为主要特征的临床综合征。肾脏病变主要是肾血管显著收缩导致的肾小球滤过率低下。

［1］ Shang J，Cao Q.Diagnosis of hepatorenal syndrome［J］.Chin J Hepatol，2011，19（3）：165-166.

［2］ Ruiz del Arhol L，Urman J，Fernand J，et a1.Systemic，renag and hepatic hemodynamie derangement in cirrhotic patientwith spontaneous bacterial peritonitis［J］.Hepatology，2003，38（5）：1210-1218.

［3］ Zhang LL.Pathogenesis of hepatorenal syndrome［J］.Chin J Hepatol，2011，19（3）：163-164.

Study Identification of Rhizoma Atractylodis Macrocephalae and Atractylodes Lancea

GAO Yan1， WANG Xiao-yu2
（1 Department of Physical and Chemical， Panjin Inspection and Testing Center， Panjin 124010， China；2 Quality Authorized Person， Liaoning Hancaotang Chinese Medicine Co. Ltd.， Yingkou 115004， China）

［Abstract］Objective To explore the identifcation of Rhizoma Atractylodis Macrocephalae and Rhizoma atractylodis. Methods This study used ITS2 sequence DNA barcode identifcation of medicinal materials and Atractylodes macrocephala. Results The 3 base Atractylodes Atractylodes and original species （Atractylodes rhizome， Atractylodes lancea and North Korea） ITS2 sequence was 229 bp. 13 Baizhu sequence only in 98 BP with C-G variation，average CG content was 69.42%； 3 Atractylodes rhizome sequences without ectopic； Guan Atractylodes rhizome and Korea Atractylodes in maximum K2P distance were 0.013. Korea Atractylodes Atractylodes， sequence together， Atractylodes Atractylodes lancea and a poly. Conclusion ITS2 sequence has a good effect on the identifcation of medicinal materials and identifcation of Rhizoma Atractylodis macrocephala.

［Key words］Atractylodes； Herb； Appraisal

中图分类号：R282.710.3

文献标识码：B

文章编号：1671-8194（2016）17-0030-02