任正宇　王小青　李晶#（燕京理工学院0级化工与制药　河北三河0650；江西省中医药研究院　南昌330046）



赣产南丹参药材含量测定研究*

任正宇1王小青2李晶2#
（1燕京理工学院2012级化工与制药河北三河065201；2江西省中医药研究院南昌330046）

摘要：目的：建立南丹参药材的含量测定方法。方法：色谱条件：色谱柱：Dikma Diamonsil C18（2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸（18∶82）；流速：1.0 ml/min；检测波长：225 nm；柱温：30℃。结果：丹参素钠在6.2～775 μg/ml范围内线性关系良好；加样回收率为101.82%；RSD分别为1.97%。结论：高效液相色谱法（HPLC）操作简单，重现性好，可用于南丹参药材的质量控制。

关键词：南丹参；丹参素钠；丹酚酸B；高效液相色谱法

南丹参为唇形科植物南丹参Salvia bowleyana Dunn.的干燥根及根茎，收载于江西省中药材标准1996年版和2014年版，历代本草中少见记载，本品为地方性习惯用药；南丹参广泛分布于江西、福建、浙江、湖南等省，均为野生品种，江西为主要分布产区之一[1]。南丹参主要含有总丹参酮、丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、咖啡酸等化学成分[2～5]。其主要水溶性成分丹参素具有多种药理作用，包括抗炎、抗肿瘤、神经保护、心肌保护、提高免疫力等[6～7]。前期我院仅对该植物中所含丹酚酸B进行了报道[8]，本实验对其所含丹参素进行含量测定研究，并同时进行了丹酚酸B的测定。现报道如下：

1　仪器与试药

Waters-1525高效液相色谱仪（美国Waters公司），SimplicityTM个人型超纯水系统（Millipore公司），CQ-250超声波清洗仪（上海船舶电子设备研究所），AG-135电子天平（梅特勒-托利多），AL-204电子天平（梅特勒-托利多）。南丹参药材：分别来源于江西南昌（2013051301、2013051302、2013061401、2013061402、2013081501）；江西德安（2013051303、2013052201）；江西婺源（2013051401、2013051402）；江西于都（2013060201）。丹参素钠对照品（含量测定用，批号：110855-200405，中国药品生物制品检定所），丹酚酸B对照品（批号：110562-200807，中国药品生物制品检定所）。甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），其它试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1丹参素钠的含量测定

2.1.1色谱条件及专属性的选择色谱柱：Dikma Diamonsil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：甲醇-0.1%磷酸（18∶82），流速：1 ml/min；经光谱测定，丹参素钠在225 nm处有最大吸收峰，故测定波长设为225 nm，柱温：30℃。在此条件下，对照品、供试品在约7min的相同时间有一色谱峰。见图1。

图1　丹参素钠测定光谱图及色谱图

2.1.2线性关系的考察精密称取丹参素钠对照品7.75 mg，置10 ml容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀（每1 ml含丹参素钠775 mg）。分别稀释成以下浓度：775、387.5、155、77.5、46.5、31、12.4、6.2 mg/ml按上述色谱条件测定，将峰面积对浓度进行回归处理，得回归方程为：Y=8 173 609X+54 568.5，r=0.999 8（n=6），丹参素钠对照品在6.2～775 mg/ml范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系。

2.1.3精密度试验精密吸取丹参素钠对照品溶液10 μl，按照精密度试验要求，连续进样6次，测定丹参素钠峰面积值，并经统计学处理，RSD为1.13%。

2.1.4稳定性试验按照上述测定条件，分别在0、1、2、5、8、12 h，精密吸取南丹参供试品溶液10 μl，注入高效液相色谱仪测定每次进样的与丹参素钠相同保留时间的色谱峰峰面积值，经统计学处理，RSD 为1.61%，结果表明：在12 h内供试品溶液中与丹参素钠相同保留时间的色谱峰峰面积值基本保持不变。

2.1.5重现性试验取6份南丹参药材粗粉约2.0 g，精密称定，分别置具塞三角瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，称重，加热回流1 h，取出，放冷，再次称重，以50%甲醇补足减失的重量，混匀，滤过，取续滤液过微孔滤膜（0.45 μm），即得供试品溶液。经测定、计算和统计学处理，6份从样品的RSD为0.73%，符合重现性试验要求。

2.1.6加样回收率试验取6份已知含量的南丹参药材粗粉约1.0 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入含丹参素钠对照品溶液（0.020 318 4 mg/ml）50 ml，称重，加热回流1 h，余后同重现性操作，制备各供试品溶液。同法测定并计算回收率，结果见表1，6份回收率测定数据经统计学处理，平均回收率101.82%，RSD=1.97%。

表1　回收率测定结果

2.1.7样品测定取不同产地的南丹参药材粗粉约2.0 g，精密称定，按上述供试品溶液制备方法操作，分别制备各供试品溶液；同上法测定、计算，结果见表2。

表2　不同产地药材中丹参素钠的测定结果（n=2）

2.2丹酚酸B的含量测定[8]

2.2.1色谱条件色谱柱：Dikma Diamonsil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相∶甲醇∶乙腈∶1.5%甲酸（17∶15∶68），流速：1 ml/min，检测波长286 nm，柱温：30℃。在此条件下，对照品、供试品在约14 min的相同时间有一色谱峰。

2.2.2对照品溶液制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1 ml含0.14 mg的溶液，即得。

2.2.3样品测定取不同产地的南丹参药材粗粉，称取约0.2 g，精密称定，分别置50 ml量瓶中，加入50%甲醇至近刻度，超声提取30 min，取出，放冷，以50%甲醇补足减失的重量，混匀，滤过，取续滤液过微孔滤膜（0.45 μm），即得供试品溶液。同上法测定、计算，结果见表3。

表3　不同产地药材中丹酚酸B的测定结果（n=2）

3　讨论

在丹参素的测定研究中，分别比较了超声与回流，50%乙醇、乙醇、50%甲醇和甲醇为溶剂，25、50、75 ml不同溶剂用量以及提取1、2、3 h，结果表明，南丹参中丹参素的提取以50%甲醇50 ml回流提取1 h效果最佳。

根据不同产地南丹参药材中丹参素钠和丹酚酸B的含量测定结果分析发现，该二种成分均以南昌产地为最高，婺源产地次之，于都产地最低。此外，我们分别比较了同一产地不同采收季节南丹参中两成分的含量，结果显示6月采集样本该两种成分含量明显高于5、8月采集样本的含量，并且5、8月样本含量无显著差异，分析可能由于4～5月南丹参处于花期，植株营养趋于地上部分，6～7月其地上部分开始进入枯萎期，此时相应的营养进入地下根部，因而成分集中且较高，而到8月份地上又开始萌发新芽，地下根部的养分再次转移到地上，从而使相应成分的含量有所下降；这个结论与根茎类药材采收期“多为秋季采挖”（地上部分枯萎前）相符。但是，由于采样的局限性，此两种含量与采收季节相关性还有待进一步研究。

参考文献

[1]江西省食品药品监督管理局.江西省中药材标准(2014年版)[M].上海:上海科技出版社,2014.230

[2]中国医学科学院药物研究所.中药志(第一册)[M].北京:人民卫生出版社,1959.339

[3]国家中医药管理局.中华本草(上册)[M].上海:上海科学技术出版社,1999.1652

[4]李静,黎莲娘,宋万志.南丹参化学成分研究[J].中草药,1994,25(7): 347-349

[5]沈建芳,王强,汪红.南丹参化学成分研究[J].中国野生植物资源, 2006,25(2):55-58

[6]周茂金,苏美英,刘昌孝.丹参素研究进展[J].中草药,2003,34(10): 24-25

[7]袁恒杰.丹参素药理作用研究新进展[J].中国医院药学杂志,2006,26 (5):604-606

[8]刘丹,余良忠,文萍.HPLC法测定南丹参中丹酚酸B的含量[J].辽宁中医杂志,2011,38(9):1872-1873

●综述与进展●

中图分类号：R284

文献标识码：B

doi:10.13638/j.issn.1671-4040.2016.02.045

*基金项目：江西省青年基金资助项目（编号：20142BAB215065）

#通讯作者：李晶，E-mail：savon@sina.com

收稿日期：（2016-01-09）