余　琴，　王乾华，　毕　昊，　余　谨，　付　蓉，　杨　茹

1武汉血液中心检验科，武汉　4300302华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科，武汉　430022

CTGF在肝纤维化过程中的表达变化及其对大鼠肝星状细胞功能的影响*

余琴1，王乾华2，毕昊1，余谨1，付蓉1，杨茹1

1武汉血液中心检验科，武汉4300302华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科，武汉430022

摘要：目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)在肝纤维化过程中的表达变化，并观察其对大鼠肝星状细胞(HSC)功能的影响。方法采用ABC免疫组化法观察肝纤维化动物模型制模后不同时间点的CTGF表达变化；构建CTGF 2个不同基因位点的shRNA重组体质粒并转染HSC，利用实时PCR检测CTGF表达，通过MTT及细胞粘附实验检测细胞功能变化。结果随着肝纤维化进展，CTGF阳性表达呈增强趋势(P<0.05)；成功构建表达靶向CTGF的shRNA重组真核表达质粒；MTT实验结果显示干扰质粒组细胞增殖水平[吸光度值为(0.81±0.06)]弱于对照组(1.39±0.07)及阴性质粒组(1.28±0.06)，均P<0.05；细胞粘附实验表明干扰质粒组细胞粘附率为(38.1±6.2)%，明显低于对照组的(63.1±3.6)%和阴性质粒组的(62.2±5.0)%，均P<0.05。结论CTGF参与了肝纤维化的过程，是促进肝纤维化发展的最重要细胞因子之一，且表达水平随肝纤维化进展逐渐升高。CTGF shRNA重组体能明显抑制HSC的增殖和粘附能力。

关键词：结缔组织生长因子；肝纤维化；肝星状细胞；细胞增殖；细胞粘附

肝纤维化的发生机制较为复杂，目前认为其形成主要是由于细胞外基质的增加而不是降解的减少[1]。在肝纤维化的发病过程中，细胞因子始终是人们研究的热点。目前认为，结缔组织生长因子(connective tissue growth factor，CTGF)被视为转化生长因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)的下游反应元件，在器官纤维化病变中可能起中心作用[2]。本文拟探讨CTGF在肝纤维化过程中的表达变化，并构建CTGF 2个不同基因位点的shRNA重组体质粒，观察其对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell，HSC)功能的影响。

1材料与方法

1.1主要材料

成年雄性Wistar大鼠(华中科技大学同济医学院实验动物学部提供)、ABC免疫组化试剂盒(VECTOR)、CTGF多克隆抗体(Abcam)、HSC-T6(武汉巴菲尔生物公……