房婷，任军，张金龙，尹可欣，杨秀旭，于蕊，张晓鹏，于长明

军事医学科学院 生物工程研究所，北京 100071



中试规模纯化重组鼠疫rF1-V融合蛋白及其免疫原性分析

房婷，任军，张金龙，尹可欣，杨秀旭，于蕊，张晓鹏，于长明

军事医学科学院 生物工程研究所，北京 100071

房婷, 任军, 张金龙, 等. 中试规模纯化重组鼠疫rF1-V融合蛋白及其免疫原性分析. 生物工程学报, 2016, 32(1): 95–104.

Fang T, Ren J, Zhang JL, et al. Pilot-scale purification of rF1-V fusion protein of Yersinia pestis and characterization of its immunogenicity. Chin J Biotech, 2016, 32(1): 95–104.

摘 要:重组F1-V融合蛋白 (rF1-V) 是目前在进行临床研究的鼠疫亚单位疫苗的主要成分。本研究摸索了rF1-V的可溶表达条件，并对条件进行了优化和放大，确定的中试发酵工艺为：在重组菌对数生长期中期加入50 μmol/L IPTG，25 ℃诱导表达5 h。通过硫酸铵分级沉淀、离子交换、疏水相互作用层析和凝胶过滤四步纯化，最终得到纯度为99%、回收率大于20%且各项检测指标合格的蛋白。在此基础上，将蛋白使用氢氧化铝佐剂进行吸附，在小鼠体内进行了免疫原性研究。ELISA测定两次皮下免疫后血清的抗体滴度。比较融合蛋白免疫组 (rF1-V) 与单一抗原免疫组 (rF1、rV) 以及联合抗原免疫组 (rF1+rV) 之间体液免疫反应的差异。结果显示：20 μg rF1-V免疫剂量组诱导的抗F1抗体滴度明显高于其他组，抗V抗体滴度与其他组相比没有显著差异。表明本工艺制备的rF1-V抗原有望作为鼠疫亚单位疫苗的主要组分。

关键词:鼠疫耶尔森菌，重组F1-V融合蛋白，发酵，分离纯化，免疫原性，亚单位疫苗

Received: February 9, 2015; Accepted: April 27, 2015

Supported by: National Science and Technology Major Project for Infectious Diseases Prevention and Control (No. 2013ZX10004001). Corresponding author: Changming Yu. Tel: +86-10-66948692; E-mail: yuchangming@126.com

国家传染病重大专项 (No. 2013ZX10004001) 资助。

网络出版时间：2015-06-08 网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.1998.Q.20150608.1503.006.html

鼠疫是由鼠疫耶尔森菌 (Yersinia pestis，以下简称鼠疫菌) 引起的自然疫源性烈性传染病。……