何永梅，王 波，李大伟，田永生，彭日荷*，姚泉洪*

（1上海海洋大学食品学院，上海201306；2上海市农业科学院生物技术研究所，上海201106）



米曲霉葡聚糖酶基因（AoEGLAI）在毕赤酵母中的表达研究及其酶学特性分析

何永梅1，王 波2*，李大伟1，田永生2，彭日荷2**，姚泉洪2**

（1上海海洋大学食品学院，上海201306；2上海市农业科学院生物技术研究所，上海201106）

摘 要：采用PTDS方法人工合成米曲霉葡聚糖酶基因（AoEGLAI），通过电击将其转化到毕赤酵母中表达，并采用DNS法对重组酶的酶学性质进行分析。结果表明：该酶耐酸但不耐热，最适反应温度为50℃，最适pH 为3.0，在30—45℃和pH 4—8时内切葡聚糖酶可保持90%以上酶活力，在底物CMC存在时其热稳定性有一定的提高。10 mmol/L的金属离子Cu2+、Ca2+、Zn+、Gr3+、Fe2+和Fe3+对酶有激活作用，Mn2+对酶则起抑制作用。该酶对胰蛋白酶有一定的抗性，对胃蛋白酶抗性相对较差。

关键词：米曲霉；内切葡聚糖酶；毕赤酵母；酶学性质

*共同第一作者

**通信作者，Tel：021-62203180，E-mail：pengrihe69@yahoo.com；E-mail：yao.quanhong65@yahoo.com

随着微生物食品生物工程技术的蓬勃发展，米曲霉（Aspergillus oryzae）作为发酵工业和食品加工业的重要菌种，日益受到广泛关注。米曲霉是一种好气性真菌，常见于粮食、发酵食品、腐败有机物、土壤等处［1］。米曲霉在调味品行业主要用于酿造酱油、豆豉、米酒等发酵食品，在酶制剂行业实现了工业化生产，部分用作食品添加剂；也用于生产天冬氨酸蛋白酶、嗜热碱性脂肪酶等异源蛋白及人溶菌酶和乳铁蛋白等医药蛋白［2］。此外，米曲霉及其提取物（如艾美福Amaferm）对牲畜、家禽的消化功能、生产性能有很大影响［3］。

2005年，米曲霉RIB40（ATCC42149）基因组测序工作由日本几家科研机构和企业联合完成，该菌株是研究米曲霉生理调控的模式菌株，测序结果表明米曲霉基因组有8条染色体［2］。……