曹继芬，户艳霞，王新中，徐发华，杨明英，赵志坚*

（1.云南省农业科学院农业环境资源研究所，昆明 650205；2.云南省烟草公司大理州公司，云南 大理 671000）

基于微管蛋白基因的烟草根黑腐病菌分子检测

曹继芬1，户艳霞2，王新中2，徐发华2，杨明英1，赵志坚1*

（1.云南省农业科学院农业环境资源研究所，昆明 650205；2.云南省烟草公司大理州公司，云南 大理 671000）

建立一种烟草根黑腐病菌新靶标的分子检测方法。以β-微管蛋白基因为靶标设计了特异性引物Tbas-tub2F/Tbas-tubR用于根黑腐病菌的PCR检测，对其检测特异性、灵敏度、早期诊断技术进行了测试。结果显示，只有根黑腐病菌能扩增到一条254 bp的特异性条带，其他19种真菌、卵菌及阴性对照均无扩增产物，表明该对引物能特异性地检测根黑腐病菌。该引物对根黑腐病菌基因组DNA检测的灵敏度为10 fg/μL。Tbas-tub2F/Tbas-tubR可从接种侵染24 h后的烟草组织中检测到根黑腐病菌，从而对根黑腐病进行准确的早期诊断。开发了烟草根黑腐病菌新靶标的分子检测和早期诊断技术。

烟草；根黑腐病菌；β-微管蛋白基因；分子检测

烟草根黑腐病是由根串珠霉[Thielaviopsis basicola (Berk. et Br.)]在烟草上引起的一种重要真菌性土传病害[1]，它遍布世界主要产烟区，使烟草生产遭受重大损失。该病原菌可侵染为害多种植物，如烟草、棉花、豆类、花生、柑桔及多种观赏的植物[2-7]。烟草根黑腐病近年来在我国有加重为害的趋势，云南、贵州、湖北等省发生较重，山东、河南、安徽、吉林、福建等省也有发生[8]。烟草根黑腐病与烟草疫霉引起的黑胫病早期侵染症状相似，而且常与其他烟草根茎部病害混合发生，给病害的识别与诊断造成困难，影响病害的正确防控。……