张小东，沈　怡，刘子琦，徐　伟，单　华，姜　北（大理大学药物研究所，云南大理　671000）



滇西地区29种药用植物抗氧化活性研究

张小东，沈怡，刘子琦，徐伟，单华，姜北*
（大理大学药物研究所，云南大理671000）

［摘要］目的：研究滇西地区29种药用植物提取物体外抗氧化活性。方法：将植物样品用75%乙醇和水依次进行提取，采用DPPH法测定各供试样品清除自由基的能力，以IC50值评价其活性。结果：在29种药用植物样品中，臭灵丹、滇白珠、反瓣老鹳草、午香草、昆明山海棠、大红袍、朝天罐、肿柄菊、滇黄芩等9种植物相关供试样品具有很好的抗氧化活性，其中反瓣老鹳草地下部分醇提物活性极好，IC50值仅为（4.1±0.1）μg/mL，好于阳性对照物维生素C。结论：反瓣老鹳草等9种植物显示出较好的抗氧化活性，具有进一步研究开发潜力与抗氧化药用价值。

［关键词］药用植物；抗氧化；DPPH；粗提物

［DOI］10.3969/j.issn.1672-2345.2016.02.001

云南地貌复杂、地理位置特殊，既处于泛北极植物区和热带植物区的过渡区，又处于中国—喜马拉雅森林植物亚区和中国—日本森林植物亚区的过渡区〔1〕，使得该地区尤其是云南西部药用植物资源异常丰富，其中很多植物有着不可忽视的药用价值，且多未进行过系统的研究或活性测试〔2-3〕。现代研究已证实，自由基清除剂及天然抗氧化剂，对于机体保护、防止老化，以及多种疾病的防治等均有十分重要的作用，因此近年来相关研究备受关注〔4-7〕。为深入了解滇西地区药用植物的价值，本实验采用DPPH法，对云南滇西地区29种药用植物不同极性溶剂的提取物进行抗氧化活性研究，以期为深入研究相关机制提供依据，为合理开发利用该地区药用植物提供科学依据。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1植物样品益母草Leonurus japonicus、臭灵丹Laggera pterodonta、土牛膝Achyranthes aspera、滇白珠Gaultheria leucocarpa var. yunnanensis、刺花莲子草Alternanthera pungens、金荞麦Fagopyrum dibotrys、凤仙花Impatiens balsamina、苦参Sophora flavescens、马尾黄连Thalictrum finetii、秧草Juncus setchuensis、云南繁缕Stellaria vestita、大王马先蒿Pedicularis rex、匍匐风轮菜Clinopodium repens、茜草Rubia cordifolia、肿柄菊Tithonia diversifolia、拔毒散Sida szechuensis、高河菜Megacarpaea delavayi、竹叶柴胡Bupleurum marginatum、滇黄芩Scutellaria amoena、反瓣老鹳草Geranium refractum、西南蝇子草Silene delavayi、午香草Anaphalis bulleyana、昆明山海棠Tripterygium hypoglaucum、犁头尖Typhonium di⁃varicatum、朝天罐Osbeckia opipara、大红袍Campylot⁃ropis hirtella、椭圆叶花锚Halenia elliptica、钟花韭Al⁃lium kingdonii、曲苞芋Gonatanthus pumilus等29种药用植物于2013—2014年间采自云南大理、临沧、丽江等地区，由大理大学药学与化学学院姜北教授、张德全博士鉴定；植物标本存放于大理大学药化学院姜北教授研究组。植物样品相关信息。见表1。

表1　29种植物样品抗氧化实验结果（±s，n=3）

表1　29种植物样品抗氧化实验结果（±s，n=3）

植物Vit C益母草(全株)臭灵丹(全株)土牛膝(全株)滇白珠(地上)刺花莲子草(地上)金荞麦(全株)凤仙花(全株)苦参(地上)苦参(地下)马尾黄连(全株)秧草(全株)云南繁缕(地上)大王马先蒿(全株)匍匐风轮菜(全株)朝天罐(全株)大红袍(根茎)科名唇形{ 菊{ 苋{杜鹃花{ 苋{ 蓼{凤仙花{ 豆{ 豆{毛茛{灯心草{石竹{玄参{唇形{野牡丹豆粗提物―乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水甲醇甲醇IC50/ (μg/mL) 12.3±0.3 74.3±1.0 347.6±9.4 19.7±0.5 71.0±1.4 363.3±23.4 521.1±42.0 12.4±0.4 63.2±1.2 268.1±18.1 2 040.5±40.0 49.2±0.9 277.8±8.4 97.9±6.5 1 819.0±272.0 103.6±1.2 319.0±4.7 334.9±5.0无活性78.0±1.3 ＞2 500.0 57.9±0.4 442.6±7.1 400.7±21.6 1 950.0±40.0 49.9±3.1 86.3±1.5 69.8±4.2 57.4±1.0 11.5±0.2 10.6±0.1植物Vit C茜草(全株)肿柄菊(地上)拔毒散(全株)高河菜(地上)竹叶柴胡(全株)滇黄芩(地上)滇黄芩(地下)反瓣老鹳草(地上)反瓣老鹳草(地下)西南蝇子草(全株)午香草(地上)昆明山海棠(地上)犁头尖(全株)曲苞芋(全株)椭圆叶花锚(全株)钟花韭(全株)科名茜草{ 菊{锦葵{十字花{伞形{唇形{唇形{牻牛儿苗{牻牛儿苗{石竹{ 菊{卫矛{天南星{天南星{龙胆百合粗提物―乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水乙醇水甲醇甲醇IC50/ (μg/mL) 12.3±0.3 69.5±1.5无活性19.3±0.0 65.5±0.3 58.6±1.8 68.9±0.9 98.0±3.7无活性53.3±1.0 408.0±56.3 18.9±0.5 374.2±8.5 21.0±0.2 81.9 10.2±0.3 18.4±0.4 4.1±0.1 11.5±0.3 89.2±3.4 353.3±18.2 12.3±0.6 59.4±0.2 9.1±0.4 18.0±0.1 66.3±1.1无活性80.7无活性75.2±0.4无活性

1.1.2试剂DPPH（1，1-二苯基-2-苦基苯肼；Al⁃drich Chem. Co，USA，批号：D21，140-0）；维生素C （Vit C）（AR，上海化学试剂分装厂，批号：84-01-10）；甲醇（AR，重庆川江化学试剂公司）。

1.1.3仪器多功能酶标仪（BIO-RAD公司生产，Synergy HT型）；电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司生产，AL204型）；可调式混匀仪（大龙兴创实验仪器（北京）有限公司生产，MX-S型）；超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司，SB-25-12DT型）。

1.2方法

1.2.1植物粗提物干粉的提取取约50 g干燥的植物样品，粉碎，用75%乙醇回流提取3次，第1次1 h，后两次1.5 h，每次溶剂约250 mL。将3次提取的溶液合并后用旋转蒸发仪在45℃下除去大部分溶剂，之后转移至冷冻干燥机上充分干燥。经75%乙醇提取过的植物残渣继续用水回流提取，共计3次，时间和溶剂剂量与醇提一致，合并提取液后用旋转蒸发仪在50℃下蒸馏近干，之后转移至冷冻干燥机上充分干燥。

1.2.2供试品及Vit C溶液的配制精确称取Vit C及各个植物样品粗提物5 mg左右，溶解在0.5 mL超纯水中，然后用超纯水按比例（1∶5）稀释成终浓度为2 500、500、100、20、4、0.8 μg/mL的样品溶液系列浓度溶液备用，配制过程中使用超声仪进行超声后，每次加样前都用涡旋器进行混匀，现配现用。

1.2.3DPPH法

1.2.3.1DPPH溶液的配制精密称量10 mg DPPH，用甲醇溶解后，移入250 mL容量瓶中，定容，摇匀，得质量浓度为40 mg/L的DPPH储备液，避光置于4℃冰箱备用。

1.2.3.2DPPH自由基清除率的测定在96孔培养板上依次从低到高加入6个浓度的样品各50 μL，然后向上述每个孔中快速准确地加入150 μL DPPH液，混匀，于37℃恒温箱中放置30 min后，在酶标仪517 nm处测定吸光度；同时设置空白对照（50 μL超纯水与150 μL DPPH）及阳性对照（50 μL Vit C与150 μL DPPH）。根据下面的公式计算供试品和Vit C对DPPH吸光度的百分抑制率〔8-11〕。

I（%）=［（Ablank－Asample）/ Ablank］×100%

1.2.3.3清除50%自由基时供试品浓度（IC50）的计算实验数据采用Microsoft Office Excel 2003进行处理，以供试品浓度（μg/mL）为横坐标，DPPH自由基清除率I（%）为纵坐标，绘制散点图和清除率曲线，在一定质量浓度范围内通过线性回归分析求得线性回归方程，根据回归方程计算IC50值。

2　结果

按上述方法对29种植物的粗提物进行了抗氧化活性测试。见表1。

根据DPPH法检测标准，当IC50≤50 μg/mL时说明样品具有较强的抗氧化活性。29种药用植物中，臭灵丹（全株）的乙醇提取物、滇白珠（全株）的乙醇提取物、反瓣老鹳草地上与地下提取物、午香草（全株）的乙醇提取物、昆明山海棠提取物、大红袍（根茎）甲醇提取物、朝天罐（全株）甲醇提取物、肿柄菊（地上）乙醇提取物、滇黄芩地上与地下乙醇提取物等具有较好的DPPH抗氧化活性，其中反瓣老鹳草地下部分的乙醇提取物活性极好，IC50值达到了（4.1±0.1）μg/mL。用SPSS17.0软件对反瓣老鹳草（地下）的乙醇提取物的抗氧化活性与阳性对照Vit C进行t检验，比较差异具有统计学意义（P＜0.01）。

3　讨论

近年来自由基生物学快速发展，广泛触及生命科学领域，主要探究自由基的组成、清除和自由基对生物学系统的损害。目前已明确许多自由基造成的疾病机理，如癌症、神经变性、慢性抑郁症、动脉粥样硬化和生理学衰老等。抗氧化剂具有清除人体自由基及疾病防治的作用〔12-15〕，对人体健康十分有益，已广泛应用于食品、药品工业中〔16-18〕。体外评价和筛选样品抗氧化活性的方法很多，其中DPPH法具有稳定性好、灵敏度高、操作简便等优点，已被广泛用于自由基清除能力的定量分析。

本文利用DPPH方法对滇西地区29种药用植物进行了体外抗氧化活性研究，发现了多种药用植物提取物对DPPH自由基具有很好的清除作用，其中反瓣老鹳草地下部分提取物具有极好的抗氧化能力，是很好的天然抗氧化植物样品。本研究为进一步探讨滇西地区药用植物抗氧化作用、追踪活性成分、开发利用天然抗氧化物质提供了依据。

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（责任编辑毛本勇）

Research on Antioxidant Activity of 29 Herbal Medicines from West Yunnan

Zhang Xiaodong, Shen Yi, Liu Ziqi, Xu Wei, Shan Hua, Jiang Bei*
（Institute of Materia Medica, Dali University, Dali, Yunnan 671000, China）

〔Abstract〕Objective: To evaluate the antioxidant activity of 29 herbal medicines from West Yunnan. Methods: The 29 medicinal plants were extracted with 75% ethanol and water successively. DPPH assay were used to measure the antioxidant activity in vitro, and the results were expressed as IC50values. Results: Nine plants, including Laggera pterodonta, Gaultheria leucocarpa, Geranium refractum, Anaphalis bulleyana, Tripterygium hypoglaucum, Campylotropis hirtella, Osbeckia opipara, Tithonia diversifolia, and Scutellaria amoena, had strong antioxidant activity. Among them, the ethanol extract of the underground part of G. refractum showed significant activity with an IC50value（4.1±0.1）μg/mL which was better than the IC50value of positive control-vitamin C. Conclusion: Nine plants had antioxidant activity and revealed the potential for further study and development with medicinal purpose.

〔Key words〕herbal medicines; antioxidant; DPPH; crude extract

［中图分类号］R28

［文献标志码］A［文章标号］1672-2345（2016）02-0001-04

［基金项目］国家自然科学基金资助项目（81460532）

［收稿日期］2015-04-28［修回日期］2015-05-26

［作者简介］张小东，硕士研究生，主要从事药理学研究.

*通信作者：姜北，教授，博士.