史　红，赵文霞，方士华，于晓雯，刘雪梅，佴科军



水通道蛋白1和血管内皮生长因子在宫颈鳞状上皮癌组织中的表达及相关性

史红1，赵文霞1，方士华1，于晓雯1，刘雪梅2，佴科军3

[摘要]目的：探讨水通道蛋白1(AQP1)和血管内皮生长因子(VEGF)在宫颈鳞状上皮癌组织中的表达及相关性。方法：应用免疫组织化学法检测41例宫颈鳞状上皮癌、55例宫颈上皮内瘤变(CIN)和22例正常宫颈组织中AQP1、VEGF的表达,探讨二者在宫颈癌组织中的表达及相关性。结果：AQP1在宫颈鳞状上皮癌、CIN的阳性率分别为90.24%、81.82%，均显著高于正常宫颈组织的40.91%(P<0．01);VEGF在宫颈鳞状上皮癌、CIN的阳性率分别为100.00%、96.36%，显著高于正常宫颈组织的63.64%(P<0.01);AQP1在宫颈鳞状上皮癌和CIN组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05),而宫颈鳞状上皮癌组织中VEGF表达均明显高于CIN组织(P<0.01);AQP1、VEGF的表达与宫颈鳞状上皮癌患者的年龄和组织学分化程度间差异均无统计学意义(P>0.05);AQP1和VEGF的表达呈明显正相关关系(P<0.01)。结论：AQP1和VEGF在宫颈鳞状上皮癌和CIN组织中表达上调，可能与宫颈鳞状上皮癌的发生、发展有一定关系。

[关键词]宫颈鳞状上皮癌；宫颈上皮内瘤变；水通道蛋白1；血管内皮生长因子

水通道蛋白1(AQP1)是第1个被鉴定的水通道蛋白，除中枢神经外，AQP1在全身微血管内皮细胞上均有表达，在恶性肿瘤的增殖性微血管内皮细胞表达更强烈[1]。有研究[2-3]表明，AQP1在疾病状态下改变了新生血管的形成，促进肿瘤血管的生长，且对血管的高渗透性和高组织间液压有着重要意义。血管内皮生长因子(VEGF)是一种内皮细胞特异性强效有丝分裂原，在体内可诱导血管发生，研究[4]表明在许多肿瘤组织中VEGF表达增高，并且其水平的高低与肿瘤的某些生物学行为有密切关系。本研究应用免疫组织化学(免疫组化)技术检测AQP1和VEGF在宫颈鳞状上皮癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)和正常宫颈组织中的表达及相关性。现作报道。

1资料与方法

1.1一般资料取保存在上海市江湾医院病理科1994年1月至2014年4月手术及宫颈活检标本，其中随机抽取正常宫颈组织22例，年龄37～61岁；从35岁以上诊断为CIN患者中随机抽取55例，其中高级别病变(HSIL)29例，低级别病变(LSIL)26例，年龄36～79岁；宫颈鳞状上皮癌41例，其中中分化32例，低分化9例，年龄25～81岁。3组患者年龄均具有可比性。 所有患者术前均未接受放、化疗。所有宫颈组织经10%甲醛固定，石蜡包埋，病理诊断明确，特殊病例经复旦大学附属妇产科医院病理科、第二军医大学附属长海医院病理科和上海市病理读片会会诊。

1.2方法

1.2.1主要试剂鼠抗人AQP1多克隆一抗(sc-25287)和羊抗鼠二抗(sc-2005)均由美国Santa Cruz公司提供；鼠抗人VEGF多克隆一抗(Ab1316)由英国Abcam公司提供，羊抗鼠二抗(sc-2005)由美国Santa Cruz公司提供；正常山羊血清、3,3′-二氨基联苯胺(DAB)和苏木精均购自碧云天公司。

1.2.2检测方法采用二步法DAB显色检测。操作步骤按试剂盒说明书进行，其中一抗稀释度为1∶100，以已知阳性片作为阳性对照，以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。

1.2.3结果判读AQP1、VEGF免疫组化染色以细胞膜或细胞质呈棕黄色为阳性细胞。高倍镜(×400)视野下综合染色强度和阳性细胞所占比例进行半定量测定，不着色0分,着色淡1分,着色适中2分,着色深3分；每张切片随机观察5个视野,计数500个细胞中阳性细胞所占比例。阳性细胞数<5%为0分,5%～25%为1分,26%～50%为2分,51%～75%为3分，>75%为4分。两项评分相加，0～1分为阴性(-),2～3分为弱阳性(1+),4～5分为中阳性(2+),6～7分为强阳性(3+)[5]。

1.3统计学方法采用秩和检验和等级相关分析。

2结果

2.1不同性质宫颈组织中AQP1和VEGF的表达比较AQP1主要表达于血管内皮细胞，定位于细胞质和细胞膜(见图1～3)；VEGF在正常宫颈组织和血管内皮细胞表达，尤其在肿瘤细胞和CIN异型细胞的细胞质和细胞膜上表达强烈(见图4～6)。在宫颈鳞状上皮癌和CIN组织中AQP1的表达均显著高于正常宫颈组织(P<0．01)，VEGF在宫颈鳞状上皮癌和CIN组织中的表达均显著高于正常宫颈组织(P<0．01)；AQP1在宫颈鳞状上皮癌和CIN组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05),而宫颈鳞状上皮癌组织中VEGF表达均明显高于CIN组织(P<0.01)(见表1)。

2.2宫颈鳞状上皮癌患者不同临床病理参数癌组织中AQP1和VEGF的表达比较和相关性分析宫颈鳞状上皮癌患者年龄与组织学分化程度间AQP1和VEGF的表达差异均无统计学意义(P>0.05)(见表2)。AQP1和VEGF在宫颈鳞状上皮癌组织的表达呈明显正相关关系(r=0.407,P<0.01)。

3讨论

3.1AQP1与宫颈鳞状上皮癌的关系研究[6]证实肿瘤组织中AQP1高表达，且表达量与肿瘤恶性程度有直接关系，恶性程度越高，AQP1表达量越高。AQP1使肿瘤血管通透性增加，促进水在肿瘤细胞间的快速转运，促进肿瘤血管生成，从而促进肿瘤的生长和转移[7]。有研究[8]发现，AQP1在宫颈鳞状上皮癌、CIN组织中的表达显著高于正常宫颈组织，但在鳞状上皮癌、CIN组织中的表达无差异；AQP1的表达与临床分期、淋巴结转移有关，但与患者年龄、肿瘤大小以及分级无关。本研究除因部分患者转往外院治疗，临床分期和淋巴结转移资料不全未作相关分析外，AQP1在宫颈鳞状上皮癌、CIN和正常宫颈组织的表达以及与宫颈鳞状上皮癌患者年龄、组织分化程度的研究结果与之一致。AQP1可能与宫颈鳞状上皮癌发生、发展有密切关系。

表1　不同性质宫颈组织中APQ1和VEGF的表达比较(n)

两两比较秩和检验：与正常宫颈组织比较**P<0.01 ；与CIN组织比较△△P<0.01

表2　宫颈鳞状上皮癌患者不同临床病理参数在癌组织中AQP1和VEGF的表达比较(n)

3.2VEGF与宫颈鳞状上皮癌的关系VEGF是目前已知的作用最强的促血管生成因子，它起着使血管内皮增生和通透性增加的双重作用，尤其是微小血管的通透性，为肿瘤细胞的生长和新生毛细血管网的建立提供营养，在肿瘤血管的形成中起重要作用。其表达水平反映了肿瘤血管内皮细胞增殖、迁移和血管重建的水平，直接反映肿瘤生长的速度和转移的倾向[3,9]。有研究[10-11]发现，VEGF在宫颈癌中高表达，与患者年龄、病理分型、组织学分化程度无明显相关，但与有无转移及临床分期有关。本研究发现在宫颈鳞状上皮癌和CIN组织中的VEGF表达均显著高于正常宫颈组织(P<0.01)，表明VEGF可能与宫颈鳞状上皮癌发生、发展有密切关系。

3.3AQP1与VEGF在宫颈鳞状上皮癌表达的相关性PAN等[12]研究结果显示，在肿瘤组织内AQP1表达水平和微血管密度呈正相关，并且瘤内AQP1和微血管密度均和VEGF的表达呈正相关。有研究[13]发现，宫颈鳞状上皮癌组织中AQP1、VEGF呈高表达,二者的表达存在正相关，提示这两个因子在宫颈鳞状上皮癌的发生、发展过程中起促进癌细胞生长、转移和血管生成的作用。本研究发现宫颈鳞状上皮癌和CIN组织中AQP1与VEGF的表达较正常宫颈组织显著升高(P<0.01)，对宫颈鳞状上皮癌中AQP1与VEGF的表达进行相关性分析后发现，二者的表达呈明显正相关关系(r=0.407，P<0．01)。提示在功能上可能存在协同作用，共同促进宫颈鳞状上皮癌的发生、发展。对AQP1与VEGF的更深入研究可能为宫颈鳞状上皮癌的治疗提供新的分子靶点和策略。

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(本文编辑周洋)

Expressions of AQP1 and VEGF in cervical squamous cell carcinoma tissue and their correlations

SHI Hong1,ZHAO Wen-xia1，FANG Shi-hua1,YU Xiao-wen1,LIU Xue-mei2,NAI Ke-jun3

(1.DepartmentofGynecologyandObstetrics,2.DepartmentofPathology,ShanghaiJiangwanHospital,Shanghai200434; 3.DepartmentofGynecology,BranchofShanghaiFirstPeople′sHospital,Shanghai200120,China)

[Abstract]Objective:To investigate the expressions of aquaporin1(AQP1) and vascular endothelial growth factor(VEGF) in cervical squamous cell carcinoma tissue and their correlations.Methods:The expressions of AQP1 and VEGF in 41 samples of cervical squamous cell carcinoma tissues,55 samples of cervical intraepithelial neoplasisa(CIN) tissue and 22 samples of normal cervical tissue were detected by immunohistochemical method,and their correlations were analyzed.Results:The positive rates of AQP1 in cervical squamous cell carcinoma tissue and CIN tissue were 90.24% and 81.82%,respectively,which was higher than that in normal cervical tissue(40.91%)(P<0.01).The positive rates of VEGF in cervical squamous cell carcinoma tissue and CIN tissue were 100.00% and 96.36%,respectively,which was significantly higher than that in normal cervical tissue(63.64%)(P<0.01).The differences of the expressions of AQP1 and VEGF between cervical squamous cell carcinoma and CIN tissue were not statistically significant(P>0.05).The differences of the expressions of AQP1 in different ages and histological grades in cervical squamous cell carcinoma tissue were not statistically significant(P>0.05),the expression of AQP1 was significantly positive correlation with the expression of VEGF(P<0.01).Conclusions:The expressions of AQP1 and VEGF in cervical squamous cell carcinoma tissue and CIN tissue are upregulated,which may be related to the occurrence and development of the cervical squamous carcinoma.

[Key words]cervical squamous cell carcinoma;cervical intraepithelial neoplasisa;aquaporin1;vascular endothelial growth factor

[文章编号]1000-2200(2016)03-0314-04·临床医学·

[收稿日期]2015-04-07

[基金项目]上海市卫生和计划生育委员会科研项目(20134139)

[作者简介]史红(1964-)，女，副主任医师.[通信作者] 佴科军，副主任医师.E-mail:jiansong81081@yeah.net

[中图法分类号]R 737.33

[文献标志码]A

DOI:10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.03.011

[作者单位] 上海市江湾医院 1.妇产科，2.病理科，200434；3.上海市第一人民医院分院 妇科，200120