闫慧丽，席　俊，高学梅，贺梦雪，陈　哲，陆启玉

(河南工业大学 粮油食品学院，河南 郑州 450001)

抗Gly m Bd 28K单克隆抗体的制备及其免疫学特性

闫慧丽，席俊*，高学梅，贺梦雪，陈哲，陆启玉

(河南工业大学 粮油食品学院，河南 郑州 450001)

摘要：利用Gly m Bd 28K天然蛋白免疫BALB/c雌性小鼠，取小鼠脾脏细胞与杂交瘤细胞融合，筛选出2株能稳定分泌抗Gly m Bd 28K单克隆抗体的杂交瘤细胞株1E3和2F4。体内诱生腹水法大量制备单克隆抗体，经纯化后，得到2株均为IgG1型的单克隆抗体mAb1E3和mAb2F4。间接ELISA方法测得mAb1E3的效价达到1∶4.10×105，对Gly m Bd 28K蛋白的半数抑制率(IC50)为23.99 μg·L-1，与花生蛋白、核桃蛋白等的交叉反应率均低于0.1%。该单克隆抗体的制备为Gly m Bd 28K致敏蛋白的检测以及抗原表位的鉴定奠定了基础。

关键词：Gly m Bd 28K；杂交瘤细胞；单克隆抗体；间接ELISA

大豆是优质植物蛋白的来源，大豆及大豆制品多达30余种，以其丰富的营养深受消费者喜爱。然而，大豆中过敏原的存在限制了一部分人对大豆及其制品的摄取。引起大豆过敏的过敏原主要有Gly m Bd 30K，Gly m Bd 28K，Gly m 60K，此外，还有一些致敏原，如大豆疏水蛋白Gly m 1、大豆外壳蛋白Gly m 2、大豆抑制蛋白Gly m 3等[1]。

Gly m Bd 28K是大豆球蛋白7S组分中的一种，能够被大约25%的大豆过敏患者血清识别[2-3]。Kumari等[4]在黑豆中也分离、纯化出了Gly m Bd 28K，这表明Gly m Bd 28K很可能存在于多种豆科植物中。如果能够了解28K蛋白的致敏机制，降低28K蛋白的致敏性，将使很多对Gly m Bd 28K蛋白过敏的患者受益。本研究拟采用杂交瘤技术制备抗Gly m Bd 28K单克隆抗体，为Gly m Bd 28K过敏原的快速检测以及致敏机理的研究奠定基础。

1材料与方法

1.1材料

Gly m Bd 28K天然蛋白：由本实验室分离纯化，经SDS-PAGE鉴定纯度，具体方法参照席俊等[5]的论文；……