常英英，梁立雄，高亚南，王颜波，丁昌俊，苏晓华，张冰玉

(中国林业科学研究院 林业研究所/林木遗传育种国家重点实验室/国家林业局林木培育重点实验室，北京 100091)

去甲基化酶基因AtROS1化学诱导表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达

常英英，梁立雄，高亚南，王颜波，丁昌俊，苏晓华，张冰玉*

(中国林业科学研究院 林业研究所/林木遗传育种国家重点实验室/国家林业局林木培育重点实验室，北京 100091)

摘要：植物去甲基化酶ROS1是表观遗传中一种重要的作用因子，参与基因的表达调控，与植物的生长发育及各种逆境响应过程密切相关。以拟南芥AtROS1基因为目的基因，采用“酶切—连接”的方法构建了以17-β-雌二醇为诱导剂的植物表达载体pER8-ROS1。将其转入农杆菌LBA4404菌株中，通过烟草瞬时表达技术，对该载体的诱导表达特性进行了研究。qPCR结果表明：17-β-雌二醇处理能够有效调控pER8-ROS1中目的基因的表达，17-β-雌二醇最佳诱导浓度为50～100 μmol·L-1；随着诱导时间的延长，目的基因表达量逐渐升高，在12 h后达到最高。该诱导表达载体的构建为研究植物抗逆胁迫过程中的表观遗传机制奠定了基础。

关键词：pER8-ROS1；17-β-雌二醇；化学诱导表达载体；瞬时表达

DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰，是植物正常生长发育所必需的，也是植物逆境响应的重要机制。DNA甲基化的水平主要靠DNA甲基化和去甲基化的作用调节，这2个过程相互平衡，维持了DNA甲基化模式的稳定。植物基因组甲基化模式的形成主要依赖于主动去甲基化，因此主动去甲基化的研究逐渐成为甲基化研究领域的重点之一。……