宋发谷 韩骏飞

结核杆菌痰检方法的临床应用比较

宋发谷 韩骏飞

目的 比较结核杆菌抗酸染色、金胺O荧光染色（以下简称荧光染色）及结核杆菌分离培养（以下简称结核培养）3种检测方法的阳性检出率，探讨最适合基层医疗机构结核杆菌筛查的检测模式。方法 选取确诊为肺结核的患者536例，期间共计痰检人次为1531次，按医学影像学和临床症状分为3个组，每位肺结核患者每痰检1次则记为1例，其中处于进展期895例，好转期357例，稳定期279例。对处于进展期、好转期和稳定期的患者的痰检标本分别采用抗酸染色、金胺O荧光染色及结核杆菌分离培养3种方法同时检测即时、夜间和晨痰3份标本。对检测结果进行统计学分析。结果 （1）肺结核进展期895例，其中抗酸染色阳性病例为266例（29.72%），金胺O荧光染色阳性病例377例（42.12%），结核杆菌分离培养阳性病例401例（44.80%）。结核杆菌分离培养阳性检出率最高,荧光染色次之,抗酸染色最低；抗酸染色与另2种检测方法之间比较差异有统计学意义（P＜0.05）；另2种检测方法之间比较差异无统计学意义。（2）肺结核好转期357例，其中抗酸染色阳性病例为7例（1.96%），金胺O荧光染色阳性病例23例（6.44%），结核杆菌分离培养阳性病例19例（5.32%）。后2种检测方法之间比较差异无统计学意义；抗酸染色与后2种检测方法之间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。（3）稳定期279例，其中抗酸染色阳性病例为5例（1.79%），金胺O荧光染色阳性病例8例（2.86%），结核杆菌分离培养阳性病例7例（2.51%）。3种方法之间比较差异均无统计学意义。结论 抗酸染色检测迅速，实验操作及设备要求简单，适合基层医疗机构大规模结核病初次筛查及稳定期患者的痰检；金胺O荧光染色检测迅速，操作简单，实验设备要求相对较高，配合抗酸染色有助于提高结核杆菌检出率，适用于肺结核治疗过程中痰菌检测；结核杆菌分离培养在3种方法中阳性检出率最高，但是检测时间相对较长，不利于结核杆菌的快速检出，可用于检测抗酸染色和金胺O荧光染色不能确定的可疑标本。

肺结核；结核杆菌；抗酸染色；金胺O荧光染色；结核杆菌快速培养；进展期；好转期；稳定期

肺结核的防治关键是早发现早治疗。在众多的检测方法中，结核菌痰检方便快捷，可靠性高，能为临床治疗提供有力的辅助诊断依据，是肺结核诊断的金标准。其它实验室辅助诊断都具有间接性，临床意义有限[1]。所以，本研究将目前应用最广泛的其中3种结核菌痰检方法的阳性检出率进行比较，探究3种方法的临床意义、适用范围以及最适合基层医疗机构结核杆菌筛查的检测模式。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年1月～2014年12月间秭归县人民医院结核门诊确诊为肺结核的患者536例。由于肺结核临床治疗需要定期做结核杆菌痰检，本院检验科2012年1月～2013年12月间肺结核患者的痰检人次达1531次，每位肺结核患者每痰检1次则记为1例，其中处于进展期895例，好转期357例，稳定期279例。肺结核易发生迁延，即同1个肺结核患者病情分期可在进展期、好转期、稳定期3期中往复，因此本研究中同1例肺结核患者在不同时期可能分组不同，故按其分组的病例数多于实际病例数。

1.2 实验材料与方法

1.2.1 标本 痰检标本：采用一次性专用痰液杯分别留取即时、夜间及晨痰3次深咳痰标本。

1.2.2 试剂与仪器设备 珠海贝索抗酸染色试剂盒:批号413012；珠海贝索金胺O荧光染色试剂盒:批号413081；珠海贝索改良结核菌罗氏培养管（酸性）Ⅱ型:批号20131008；德国蔡司研究级偏光显微镜:型号Axioskopt40Pol；帆船牌载玻片:规格25.4mm×76.2mm；苏净安泰生物安全柜:型号BSC-1000ⅡA2型；酒精灯；上海恒字隔水式电热恒温培养箱:型号PYX-DHS-BS-Ⅱ型。

1.2.3 实验操作 对处于进展期、好转期和稳定期的患者的痰检标本分别采用抗酸染色、金胺O荧光染色及结核杆菌分离培养3种方法同时检测即时、夜间和晨痰3份标本。患者痰检3份标本，只要1份标本痰检发现抗酸杆菌，即该患者视为痰检阳性病例[2]。

1.3 统计学方法 所有数据采用SPSS19.0统计软件分析，计量资料采用“x±s”表示，组间比较采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 进展期肺结核患者的痰检结果 阳性检出率最高的是结核培养，895例肺结核进展期的患者痰检阳性401例，其次是荧光染色377例，抗酸染色阳性检出率为3种方法中最低为266例。统计分析结果表明，抗酸染色与荧光染色方法之间差异具有显著统计学意义（χ2抗酸-荧光=29.90，P＜0.01）；抗酸染色与结核培养方法之间差异具有显著统计学意义（χ2抗酸-培养= 43.55，P＜0.01）；荧光染色与结核培养方法之间差异无统计学意义（χ2培养-荧光=1.31，P＞0.05）。见表1。

表1 895例进展期肺结核患者的痰检结果

2.2 好转期肺结核患者的痰检结果 阳性检出率最高的是荧光染色，357例肺结核好转期的患者痰检阳性23例，其次是结核培养19例，抗酸染色敏感度为3种方法中最低为7例。统计分析结果表明，抗酸染色与荧光染色及结核培养2种方法之间差异具有统计学意义（χ2抗酸-荧光=8.91,P＜0.05；χ2

抗酸-培养=5.75，P＜0.01）；荧光染色与结核培养方法之间差异无统计学意义（χ2

抗酸-培养=0.4，P＞0.05）。见表2。

表2 357例好转期肺结核患者的痰检结果

2.3 稳定期肺结核患者的痰检结果 从表3中可以看出，3种方法阳性检出率最高的是荧光染色，279例肺结核稳定期的患者痰检阳性8例，其次是结核培养7例，抗酸染色阳性检出率为3种方法中最低为5例。统计分析结果表明，抗酸染色、金胺O荧光染色及结核培养3种方法之间差异均无统计学意义（χ2

抗酸-荧光=0.71，χ2抗酸-培养=0.34，χ2

培养-荧光=0.07，P＞0.05）。见表3。

表3 279例稳定期肺结核患者的痰检结果

3 讨论

结核菌检查是确诊肺结核最具特异性的方法，痰中找到结核菌是确诊肺结核的主要依据[3]。抗酸染色镜检快速简便，在我国非典型分枝杆菌比较少见，因此抗酸杆菌痰检阳性，基本即可诊断为结核杆菌阳性。多次痰检，每次痰检采集清晨、夜间、及时3次痰液标本送检，痰液涂片采取厚涂片[4]，为目前普遍采用。

金胺O荧光染色法适合于大量标本快速检查[5]。对于菌阴性肺结核患者，在必要的时候，可以通过纤支镜直达病灶检查，或从其涮洗液中查找结核菌[6-7]。

结核病的细菌学检查是检测结核杆菌的重要手段，是结核病确诊和制定治疗方案的重要依据[8]。结核菌培养不仅能判断患者是否感染结核菌，而且培养出的结核菌还可作药物敏感试验与菌型鉴定[9]。结核菌生长缓慢，使用改良罗氏培养基，通常需4～8周才能报告。培养时间较长，但检测结果可靠，特异性高，尤其在涂片阴性或诊断有疑问时，培养更为重要[10]。培养菌株作药物敏感性实验，可以为肺结核临床治疗提供参考[11]。本研究采用上述3种方法检测已经过临床诊断确认处于进展期、好转期和稳定期的病例，比较其阳性检出率。

从本实验结果的表1中可以看出，处于进展期的肺结核患者体内结核杆菌活性较高，3种方法的结核杆菌检出率都较高。同时，抗酸染色与荧光染色和结核培养的检测结果比较差异具有统计学意义（P＜0.05），荧光染色与结核菌培养的检测结果比较差异无统计学意义。阳性病例在荧光显微镜黑暗背景下呈亮绿色或黄绿色杆状,不易漏检。在荧光镜中倍物镜(20×)下镜检,其视野约为0.14mm2,而抗酸染色法采用油镜下镜检,油镜下视野面积约为0.102mm2,因此,在相同时间内,荧光染色法镜检时所扫读面积比抗酸染色法镜检时多20倍左右,更易检出抗酸杆菌[12-13]，从而可以提高检出率。结核杆菌的罗氏培养基培养法一直是肺结核诊断的金标准,是目前活菌检测不可替代的方法,也是化疗反应的主要监测指标[14],还可以在其基础上进行菌种鉴定和药敏实验[11]。本研究中结核培养阳性检出率，与相关文献的报道基本一致[15]。相比较而言,3种方法中抗酸颜色实验设备要求最低,检测速度快,结果可靠,可以当天报告结果,具备及时性;荧光染色实验设备要求较高,需要荧光显微镜,检测速度快,结果可靠也可以当天报告结果,具备及时性;结核培养实验设备要求较高,需要培养箱和振荡器，其检测结果是结核病诊断的金标准，但是培养时间长，当天不能报告结果，具有滞后性。

从本实验结果的表2中可以看出，处于好转期的肺结核患者，实验中3种方法痰检结果阳性检出率都有很大幅度的降低，这与好转期结核病患者用药治疗以及患者自身的免疫力有关。同时，抗酸染色与荧光染色和结核培养检测结果差异有统计学意义(P＜0.05)，荧光染色与快速培养检测结果比较差异无统计学意义。其中，荧光染色阳性检出率高于结核培养，这可能与患者药物化疗对结核杆菌产生抑制作用有关。结核杆菌的培养，一般需要45天时间，且对培养条件要求较高，不能做出早期诊断和及时的治疗；而且荧光染色报告结果所需时间短［13］，因此，金胺O荧光染色更适用于治疗过程中肺结核痰菌快速检测。

从本实验结果的表3中可以看出，处于稳定期的肺结核患者，实验中3种方法痰检结果阳性检出率都有很大幅度的降低，这可能与稳定期结核病患者用药治疗以及结核病病灶钙化痊愈有关。抗酸染色、荧光染色和结核培养3种方法检测结果比较差异均无统计学意义。防治结核（TB）病目前的战略是基于患者的早期检测和治疗从而停止病菌传播[16]，因此，抗酸染色配合金胺O荧光染色即可胜任稳定期肺结核患者的痰检。

综上所述，抗酸染色检测迅速，实验操作及设备要求简单，适合基层医疗机构大规模结核病初次筛查及稳定期患者的痰检；金胺O荧光染色检测迅速，操作简单，实验设备要求相对较高，配合抗酸染色有助于提高结核杆菌检出率，适用于肺结核治疗过程中痰菌检测；结核杆菌分离培养在3种方法中阳性检出率最高，但是检测时间相对较长，不利于结核杆菌的快速检出，可用于检测抗酸染色和金胺O荧光染色不能确定的可疑标本。

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Objective Comparison of Mycobacterium tuberculosis by acid fast staining,auramine O fluorescence and Mycobacterium tuberculosis culture 3 methods for the detection of positive rate,detection of the Mycobacterium tuberculosis screening in primary health care institutions.Methods Select 536 cases of pulmonary tuberculosis patients,during this period a total of sputum specimens 1531 copies,according to medical imaging and clinical symptoms of the divided into three groups,each pulmonary tuberculosis patients per sputum examination is recorded as an example,which is in the progress of 895 cases of improved 357 cases,stable 279 patients.The in progress,improvement and stable period in patients with sputum specimens respectively by acid fast staining,auramine O fluorescent staining and Mycobacterium tuberculosis separation culture 3 kinds of method for the simultaneous determination of instant,night and morning sputum 3 specimens.The test results were statistically analyzed. Results （1）Pulmonary tuberculosis in 1 advanced stage in 895 cases,among them acid fast staining positive were 266 cases (29.72%),auramine O fluorescence staining was positive in 377 cases (42.12%),isolation and culture ofthe 401 positive cases of Mycobacterium tuberculosis (44.80%). Mycobacterium tuberculosis isolation and culture of the highest positive rate,fluorescence stainingtime,acid fast staining minimum; between the 2 methods for the detection of acid fast stain and then compare the difference was significant statistically significant (P＜0.05);no statistical significance between differences after 2 detection methods.（2）Pulmonary tuberculosis in 2 remission in 357 cases,among them acid fast staining positive were 7 cases (1.96%),auramine O fluorescence staining was positive in 23 cases (6.44%),isolation and culture of the 19 positive cases of Mycobacterium tuberculosis (5.32%).Between the 2 kinds of detection methods have no significant difference; between the 2 methods for the detection of acid fast stain and then compare the difference was significant statistical significance (P＜0.05). （3）stable stage in 279 cases, among them acid fast staining positive were 5 cases (1.79%),auramine O fluorescence staining was positive in 8 cases (2.86%),isolation and culture of the 7 positive cases of Mycobacterium tuberculosis (2.51%).Comparisonbetween 3 methods had no significant differences between the statistical significance.Conclusion Acid fast staining rapidly,experimental operation andsimple equipment requirement,sputum examination formedical institutions at the grassroots massfirst screening and TB patients in stable stage; auramine O fluorescence staining was rapid, simple operation, experimental equipment requirements are relatively high,with acid fast staining is helpful to improve the detection rate of Mycobacterium tuberculosis,is suitable for the detection of sputum tuberculosis in the course of treatment;isolation and culture in the 3 method the highest positive rate of Mycobacterium tuberculosis,but the detection timeis relatively long,is not conducive to the rapid detection of Mycobacterium tuberculosis,can be used for detection ofacid fast stain and auramine O fluorescence staining of suspicious samples could not be determined.

Pulmonary tuberculosis; Tuberculosis; Acid fast staining; Auramine O fluorescence; Rapid culture of Mycobacterium tuberculosis; Advanced; Better period; Stable period

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.21.002

湖北 443600 秭归县人民医院检验科 （宋发谷 韩骏飞）