张艳芬刘利鹏陈瑶崔哲毕克维王南南刘中成

（1. 河北大学科学技术处，保定 071002；2. 河北大学药学院，保定 071002）

大鼠sFcγRIIb基因原核表达及活性鉴定

张艳芬1刘利鹏2陈瑶2崔哲2毕克维2王南南2刘中成2

（1. 河北大学科学技术处，保定 071002；2. 河北大学药学院，保定 071002）

旨在克隆大鼠FcγRIIb基因，构建sFcγRIIb原核表达体系，制备重组大鼠sFcγRIIb蛋白。采用RT-PCR技术从RBL-2H3细胞中克隆FcγRIIb胞外区基因，构建重组表达质粒转化大肠杆菌诱导表达，镍柱亲和层析纯化重组蛋白，复性后利用Western blotting、ELISA进行鉴定。结果显示，成功克隆大鼠sFcγRIIb基因，构建原核表达载体sFcγRIIb-pET17b，转化大肠杆菌BL21（DE3）。通过对表达体系进行优化，确定IPTG浓度为1.0 mmol/L，诱导时间为4 h时蛋白表达效率最高，重组蛋白主要以包涵体形式存在。包涵体经8 mol/L尿素溶解，利用Ni-NTA柱亲和层析获得了较高纯度的重组蛋白。采用梯度透析复性法对sFcγRIIb进行复性后，经Western blotting、ELISA与竞争性ELISA鉴定，重组蛋白sFcγRIIb可被特异性抗体所识别且与IgG具有结合能力。成功建立了大鼠FcγRIIb基因原核表达体系，制备了具有生物学功能的重组蛋白。

抑制性受体；FcγRIIb基因；原核表达；重组蛋白

Fc受体（FcR）广泛表达于免疫活性细胞，介导免疫细胞与抗原-抗体复合物及其他细胞间的相互作用，触发广泛的免疫效应［1］。FcγRIIb（Fc gamma receptor IIb，FcγRIIb，即 CD32B）是目前发现的唯一 Fcγ抑制性受体，在免疫、肿瘤、感染性疾病、自体免疫性疾病等方面发挥的负性调节作用，受到越来越多学者的关注［2］。FcγRIIb广泛分布于B细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞和嗜中性粒细胞，及除CD8记忆性T细胞外的其他T细胞和NK细胞以外的所有白细胞［3，4］。……