林艳梅 李瑞杰 张慧杰 秦秀林 冯家勋

（广西大学生命科学与技术学院 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，南宁 5300 04）

纤维素酶高产菌株Tri choderma atroviride HP35-3原生质体制备及转化

林艳梅 李瑞杰 张慧杰 秦秀林 冯家勋

（广西大学生命科学与技术学院 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，南宁 5300 04）

旨在优化深绿木霉（Trichoderma atroviride）菌株HP35-3原生质体制备和转化条件，便于对该菌株进行遗传操作以提高其纤维素酶产量。分别对制备深绿木霉原生质体的菌龄、酶解时间、酶组分及比例和转化条件进行优化。结果显示，利用3 mg/mL蜗牛酶、3 mg/mL溶菌酶和3 mg/mL裂解酶酶组分酶解菌龄10 h的菌丝2 h，获得的原生质浓度达到3.5×107个/mL以上，原生质体再生率为61%。利用原生质体进行PEG介导转化，当原生质体浓度为1×108个/mL、外源DNA 为5 μg时，转化率达到35个转化子/μg DNA。建立的高效原生质体制备及转化体系可用于深绿木霉的遗传转化及菌株改造。

深绿木霉；丝状真菌；原生质体制备；原生质体转化

原生质体的制备是丝状真菌遗传操作中较为重要的环节［1］。原生质体广泛应用于菌株生理、生化研究［2］；应用原生质体融合技术可进行遗传育种和菌种改造［3，4］；原生质体转化技术可用于基因敲除和外源基因的导入等遗传操作［5］。而这些技术的关键是制备一定数量再生率较高的原生质体。

随着丝状真菌在工业酶生产中的应用及其基础研究的快速发展，丝状真菌高效原生质体制备方法的研究也与日俱增。通常情况下，酶解细胞壁所用的酶组成［6］、酶浓度和酶解时间［7］，菌丝的菌龄、渗透压稳定剂［8］等都是制备高质量原生质体需优化的因素。……