单孟林，丁 滔，郑江花，程增辉，郭 颖，夏前林.复旦大学附属公共卫生临床中心医学检验科，上海 0508；.上海交通大学附属第六人民医院南院泌尿外科，上海 0033



应用甲基化基因检测技术分析前列腺癌中HIC1的甲基化状态

单孟林1，丁 滔2，郑江花1，程增辉1，郭 颖1，夏前林1
1.复旦大学附属公共卫生临床中心医学检验科，上海 201508；2.上海交通大学附属第六人民医院南院泌尿外科，上海 200233

［摘要］背景与目的：癌高甲基化基因1（hypermethylated in cancer 1，HIC1）因表观遗传甲基化修饰导致其在多种癌细胞和组织中表达沉默，可能与肿瘤的发生、发展有关。而这一现象在前列腺癌研究中的报道甚少。该研究采用甲基化基因检测技术对前列腺癌中HIC1启动子进行甲基化状态分析。方法：采用甲基化特异性聚合酶链式反应（methylation-specific polymerase chain reaction，MSP）和亚硫酸盐测序PCR（bisulfate sequencing PCR，BSP）技术，对前列腺癌细胞PC3、C4-2B和正常前列腺上皮细胞PrEC，以及前列腺癌组织标本和正常前列腺穿刺标本，进行HIC1启动子甲基化分析；并使用去DNA甲基化酶5-Aza-CdR处理PC3、C4-2B和PrEC，经反转录PCR（reverse transcription-PCR，RT-PCR）和蛋白［质］印迹法（Western blot）分析HIC1在基因水平和蛋白质水平上的变化。结果：MSP分析结果发现，在PC3、C4-2B和PrEC中HIC1甲基化率分别为78.23%、72.15%和10.63%，差异有统计学意义（P＜0.05）。对36例人前列腺癌实体瘤和36例人前列腺正常穿刺组织进行BSP测序，统计显示，甲基化率分别是80.30%和31.56%。5-Aza-CdR处理后的PC3、C4-2B和PrEC经RT-PCR和Western blot分析发现，与未处理对照相比，HIC1转录水平和蛋白水平表达均显著上调。结论：在前列腺癌中，抑癌基因HIC1启动子呈高度甲基化状态并出现表达沉默或下调，可作为前列腺癌的早期预测指标和潜在的治疗靶点。……