华北理工大学附属开滦总医院普外科 (唐山 063000)

王明君　张青松∆　曹立赢　温英武　费乐学　高建超　郑景珍　钟　烁　王　瑜



甲基硫代腺苷对结肠癌RKO细胞增殖及RNA聚合酶Ⅲ依赖基因转录影响实验研究*

华北理工大学附属开滦总医院普外科 (唐山 063000)

王明君张青松∆曹立赢温英武费乐学高建超郑景珍钟烁王瑜

摘要目的：探讨甲基硫代腺苷(MTA)对结肠癌RKO细胞增殖的影响及其转录水平相关机制。方法：采用MTT比色技术及细胞计数作生存曲线的方法分析MTA对结肠癌RKO细胞增殖的影响，并采用Realtime PCR的方法分析RNA聚合酶Ⅲ依赖基因(tRNAs、5S rRNA)。结果：0.5、1、2、3mmol/L MTA作用16h后，RKO细胞的增殖能力分别为对照组的(84.1±4.5)%、(69.4±5.2)%、(55.3±3.8)%、(40.9±3.5)%(P均<0.01)；MTA 0.5mmol/L作用4、8 h后，RKO细胞tRNAs、5S rRNA的转录水平分别为对照组的0.584±0.033、0.624±0.035，0.453±0.025、0.372±0.027(P均﹤0.01)。结论：MTA对RKO细胞具有明显的抗肿瘤活性，且对RNA聚合酶Ⅲ依赖基因转录的下调可能起到重要作用。

主题词@甲基硫代腺苷结肠肿瘤/病理学细胞增殖RNA聚合酶Ⅲ

甲基硫代腺苷(Methylthioadenosine,MTA)是多胺和蛋氨酸代谢过程中的代谢产物。我们以往的研究表明MTA对结肠癌RKO细胞的增殖具有明显的抑制作用[1]。本研究为明确其具体机制，着重研究MTA对结肠癌RNA聚合酶Ⅲ依赖基因(tRNAs、5S rRNA)的转录水平的影响，旨在为MTA的临床使用提供实验理论依据。

材料和方法

1材料 结肠癌RKO细胞购自ATCC公司；MTA，MTT(噻唑蓝)购自Sigma公司，MTA用二甲亚砜配成0.5 mmol/L溶剂；RKO细胞用含100 mL/L小牛血清MEM培养液培养；RNA提取试剂盒购自Genemega公司；cDNA合成试剂盒(编号28025-013)、RNaseOUT 核酸抑制剂(编号10777-019)、随机引物(编号48190-011)、0.1MDTT(编号00147)购自invitrogen公司；RT-PCR引物设计如下：tRNAs(F) 5’-GTC AGG ATG GCC GAG TGG TCT AAG-3’, (R) 5’-CCA CGC CTC CAT ACG GAG AAC CAG AAG ACC C-3’； 5S rRNA(F)5’-GGC CAT ACC ACC CTG AAC GC-3’，(R)5’-CAG CAC CCG GTA TTC CCA GG- 3’。

2方法

2.1细胞增殖检测：实验分为对照组和MTA组，药物处理前1 d种植于6孔板。MTA的浓度分别为0.5、1、2及3 mmol/L，处理过程中使每组均含有等量的二甲基亚砜。每一分组均另有2个复孔， MTA的作用时间均为16 h。在细胞被处理16 h后，弃去培养液，加入5 g/L MTT溶液(M-0283)100 μl后，再加入新鲜培养液1 ml。……