耿文超，赵伊英，刘　峰，汪小东，李艳军，孙　杰

(石河子大学 农学院，新疆石河子　832000)



同步抑制棉叶螨TtAK与TtCHI基因表达的RNAi载体的构建

耿文超，赵伊英，刘峰，汪小东，李艳军，孙杰

(石河子大学 农学院，新疆石河子832000)

摘要为在植物中表达针对棉叶螨精氨酸激酶基因TtAK与几丁质酶基因TtCHI的双链RNA，以改良植物对棉叶螨的抗性。采用PCR技术，分别扩增获得靶标基因TtAK与TtCHI的功能区域片段453 bp与610 bp，通过PCR引物引入特定的酶切位点，采用DNA标准重组技术与Gateway技术相结合的方法，以RNA干扰载体pB7GWIWG2(Ⅱ)为基础，成功构建出针对棉叶螨TtAK与TtCHI基因的RNAi载体。为遗传转化棉花，改良棉花对棉叶螨的抗性奠定基础。

关键词TtAK基因；TtCHI基因；Gateway技术；RNA干扰；载体构建

新疆棉花主要害螨为土耳其斯坦叶螨(Tetranychusturkestani)，该螨属蛛形纲蜱螨目叶螨科，广泛存在于所有棉花种植区。其主要集中在棉花叶片背面，吸取汁液，自下而上造成棉株红叶，抑制棉花的生长发育，并且引起蕾铃大量的脱落。近年来，新疆棉区棉叶螨繁殖、扩散速度快，虫口密度大，呈偏重发生态势，危害严重时可造成棉田减产30%以上[1]。长期依赖化学药剂防治，不但使棉叶螨的抗药性增强，而且还杀死大量有害螨的天敌。因此，通过培育抗叶螨棉花品种来降低棉叶螨的危害程度，是新疆棉花生产亟待解决的一个重要问题。

近年来，通过转基因的方法让植物体内表达昆虫基因的双链RNA(dsRNA)，当植食性昆虫取食进入到昆虫体内，从而抑制昆虫相应靶标基因，表达的RNAi技术已应用于改良植物抗虫性[2-7]。……