解学龙，张利仁

(1.宜宾市第二人民医院检验科，四川宜宾 644000；2.泸州医学院，四川泸州 646000)



·临床研究·

XE-2100光学法测血小板在大血小板测定中的应用

解学龙1，张利仁2

(1.宜宾市第二人民医院检验科，四川宜宾 644000；2.泸州医学院，四川泸州 646000)

摘要:目的探讨SYEMEX XE-2100光学法检测含大血小板比例高的标本血小板计数的准确性。方法用手工计数法、电阻抗法、光学法同时测定同一标本中血小板数，以手工计数法为标准，对收集数据进行配对t检验和相关分析。结果SYEMEX XE-2100光学法对含大血小板比例高的标本血小板计数测定重复性好，在对380例标本相关分析结果显示光学法测定结果比电阻抗法更接近参考方法。结论在血小板计数结果疑似有大血小板时使用SYEMEX XE-2100光学法测定血小板结果更准确。

关键词:电阻抗法；光学法；大血小板

血小板计数对血液系统疾病的诊断与治疗有重要的参考价值。准确计数血小板(PLT)在PLT减少性疾病的诊断和治疗过程中非常重要。血小板计数的准确性是临床医生和检验人员共同关注的问题，尤其是大血小板的准确计数，孕妇、心血管疾病、血液病等患者血液中含大血小板较多，大多数血细胞分析仪测定血小板因采用电阻抗法受限于其功能，多无法准确计数，从而使血小板假性降低[1-2]。因此，准确计数血小板尤为重要。日本希森美康公司Sysmex XE-2100型全自动血液分析仪采用电阻抗和流式细胞激光技术．其计数血小板采用了电阻法及二维激光散两种方法来测定血小板[3-5]。为了探讨光学法检测大血小板的应用价值．分别用XE-2100血液分析仪的电阻抗法和光学法以及手工镜检计数法对380例涂片镜检有大血小板且血小板计数小于100×109/L标本和80例无大血小板的对照标本进行血小板计数，现报道如下。

1材料与方法

1.1标本来源380例样本均为本院患者血小板数量小于100×109/L(大血小板组)，均经涂片、染色、镜检证实，其血标本含较多大血小板且无血小板聚集，电阻抗法测定结果均显示直方图异常，建议复查。80例样本均为本院患者血小板数量小于100×109/L(对照组)，均经涂片、染色、镜检证实，其血标本无大血小板和血小板聚集，电阻抗法测定结果均显示直方图正常。本院住院患者静脉血标本用EDTA-K2抗凝，抗凝抽静脉血2 mL。

1.2仪器与试剂日本希森美康公司Sysmex XE-2100全自动血液分析仪，用配套校正品校正，原装配套试剂。

1.3方法分别用Sysmex XE-2100的电阻抗法(PLT-I)和光学法(PLT-0)及手工镜检法(PLT-M)，3种方法分别对上述380例含有大血小板的标本和80例无大血小板的对照标本进行血小板计数。电阻抗法(PLT-I)检测采用仪器第3检测模式(CBC+DIFF)进行检测；光学法(PLT-0)检测用仪器第4检测模式(CBC+DIFF+RET)进行检测；以手工镜检法为标准，判断Sysmex XE-2100计数血小板结果的准确性，手工计数采用显微镜法:草酸铵稀释液0.38 mL 加20 μL 血液，混匀，充分溶血后吸取PLT悬液注入牛鲍计数池，由两名中级职称技术人员镜检计数PLT，每份标本计数2 次，取平均值。实验在采血后4 h内完成。镜检法PLT稀释液，按《全国临床检验操作规程(第3版)》配制[6]，OLYMPUS显微镜。方法为世界卫生组织(WHO)推荐的草酸铵稀释液法。

2结果

2.1电阻抗法与手工法检测结果比较大血小板组电阻抗法与手工镜检法两种方法比较差异有统计学意义(P<0.05)，对照组电阻抗法与手工镜检法两种方法比较差异无统计学意义(P>0.05),检测结果及数据见表1。

表1　电阻抗法和手工镜检PLT检测结果

2.2光学法与手工镜检法检测结果比较大血小板组光学法与手工镜检法两种方法比较差异无统计学意义(P>0.05)，对照组电阻抗法与手工镜检法两种方法比较差异无统计学意义(P>0.05),检测结果及数据见表2。

2.3电阻抗法与光学法检测结果比较大血小板组电阻抗法与光学法两种方法比较差异有统计学意义(P<0.05)，对照组电阻抗法与光学法两种方法比较差异无统计学意义(P>0.05),检测结果及数据见表3。

表2　光学法和手工镜检PLT检测结果

表3　电阻抗法与光学法PLT检测结果

3讨论

准确计数外周血的血小板一直都是医学界关注的重要话题[7-9]。血细胞分析仪测定红细胞血小板在同一通道中使用电阻抗法，根据颗粒大小来区分红细胞血小板[10]，小红细胞的存在便会干扰PLT计数的准确性，从而导致PLT结果假性增高；而当血液标本中PLT颗粒大于30 fL时，仪器便会把PLT当成红细胞计数从而导致PLT结果假性减少[11]。WHO推荐的血小板计数参考方法，也存在血小板在计数板上的分布误差，充池是否均匀等众多因素的影响。而最大的缺点是计数的血小板太少，检测速度慢，重复性较差[7]。而卫生部行业标准规定的PLT计数参考方法为荧光标记PLT特异抗体流式细胞术[12]。此法烦琐且价格昂贵，难以推广应用，仅适用于特殊病例和用于建立参考方法和校准仪器[13-14]。

本研究380例涂片镜检有大血小板且血小板计数小于100×109/L标本的电阻抗法血小板计数结果低于光学法和人工镜检法，电阻抗法测定结果与光学法和人工镜检法比较差异有统计学意义(P<0.05)，而光学法与WHO推荐的人工镜检法比较差异无统计学意义(P>0.05)。在80例无大血小板的对照组中电阻抗法血小板计数结果与光学法和人工镜检法较差异无统计学意义(P>0.05)。分析其主要原因是SYEMEX XE-2100测定血小板光学原理为半导体激光流式细胞检测，在血小板进行荧光染色后，对每个血小板从高低角度二维激光扫描，即用前向散射光检测血小板体积，侧向荧光对血小板内部RNA和DNA成分进行鉴别计数。在流式细胞仪通道被荧光物质标记后用荧光识别，由于红细胞(包括小红细胞和红细胞碎片不会对荧光着色，根据细胞大小和荧光强度可以把小红细胞及其他杂质与血小板区分开，从而排除干扰，得到更可靠的血小板结果。该法可对大血小板、小红细胞、细胞碎片、脂类与蛋白的聚合体、免疫复合物等进行有效鉴别，提供一个更为准确血小板计数的结果[15-17]。

总之,Sysmex XE-2100光学法血小板测定可以较为准确的测定混有大血小板的异常血液标本的血小板数，为检测血小板数提供一个准确而客观的重要手段。

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(收稿日期：2016-01-25)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.063

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)09-1288-03