于　明，靳海龙，张宝秋

(首都医科大学附属北京胸科医院/北京市结核病胸部肿瘤研究所检验科，北京 101149)



·论著·

27例乙二胺四乙酸依赖性假性血小板减少特点及临床分析

于明，靳海龙，张宝秋△

(首都医科大学附属北京胸科医院/北京市结核病胸部肿瘤研究所检验科，北京 101149)

摘要:目的分析乙二胺四乙酸(EDTA)导致血小板聚集的特点，探讨与此现象有关的危险因素。方法用Sysmex XN-3000对2014年1月至2015年8月间的30 700例EDTA-K3抗凝标本测定，其中27例发生EDTA依赖性假性血小板减少(EDTA-PTCP)。再次采集27例患者的EDTA-K3和枸橼酸钠抗凝血标本进行测定并制作血涂片，显微镜检观察血小板分布，同时采集指血手工计数血小板。分析27例患者的生化指标，并与50例非EDTA-PTCP体检健康者结果对比。结果EDTA抗凝血血小板数明显低于枸橼酸钠抗凝血,差异有统计学意义(P<0.05)，而枸橼酸钠抗凝血与手工法结果相近(P>0.05)。EDTA-PTCP患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血糖(Glu)、三酰甘油(TG)比健康者高，而高密度脂蛋白(HDL)要比健康者低，差异有统计学意义(P<0.05)。结论EDTA引起假性血小板减少的程度取决于患者对EDTA的敏感度,该现象的存在可能与高血脂、高血糖有关。当发生EDTA-PTCP时，应更换抗凝剂或者手工计数血小板，从而避免漏诊。

关键词:乙二胺四乙酸;假性血小板减少；血小板聚集；高血糖症；高脂血症

乙二胺四乙酸(EDTA)依赖性假性血小板减少(EDTA-PTCP)是一种发生在体外的血小板聚集现象，这种现象导致血细胞计数仪无法准确计数而出现血小板数量明显减少[1]。虽然EDTA被认为是全血细胞计数及分类的最理想抗凝剂，但同时也是引起假性血小板减少最常见的原因[2]。研究报道EDTA-PTCP患者的发生率为0.07%～0.2%[2-4]。而在恶性肿瘤、慢性肝病、孕妇、自身免疫病及心血管疾病的患者中发生率较健康者高[5]。因此，本文主要分析EDTA依赖性血小板减少特点，并通过生化指标的分析，探讨与EDTA-PTCP发生相关的危险因素。

1资料与方法

1.1一般资料2014年1月至2015年8月本院住院患者EDTA-K3抗凝血细胞标本30 700例，排除存在冷凝集和不可见凝块标本，最终确认27例EDTA-PTCP(EDTA-PTCP组)，其中男性16例，年龄24～81岁，女性11例，年龄15～85岁。EDTA-PTCP的筛选标准在Lin等[6]的基础上还有两处改进。(1)初诊血小板计数小于100×109/L或者3 d内血小板数值较历史结果减少30%以上，同时未见出血或出血倾向等临床表现或症状。(2)血细胞分析仪报警信息提示血小板聚集。对照组50例标本全部来自于本院体检健康者，按照筛选标准无EDTA-PTCP及其他疾病。

1.2仪器与试剂Sysmex XN-3000全自动血细胞分析仪(日本希森美康公司)、Beckman Coulter AU2700全自动生化分析仪(美国Beckman Coulter公司)以及原厂配套试剂和质控品。EDTA-K3、枸橼酸钠(3.2%)抗凝剂真空采血管以及生化促凝管(美国BD公司)。瑞氏-吉姆萨染液(珠海贝索生物技术有限公司)。血小板计数稀释液，参照《全国临床检验操作规程》配制[7]。Olympus CX-21显微镜(日本Olympus公司)。

1.3方法使用Sysmex及Olympus配套试剂及质控品，按照实验室标准操作程序(SOP)进行质控品测定，结果均在允许范围内。将EDTA-K3和枸橼酸钠抗凝标本充分混匀，按照标准流程上机检测。对符合EDTA-PTCP任意筛选标准的标本，在排除标本质量问题和检测偶然误差外，行血涂片检查，瑞氏-吉姆萨染色后油镜(×100倍)观察血小板分布情况。确认血小板聚集的患者再次采集EDTA和枸橼酸钠抗凝血各1管，同时采集指血，稀释后行血小板手工计数，测定方法参照《全国临床检验操作规程》进行操作，枸橼酸钠抗凝血测定的血小板数值应乘以1.1[8]。对符合EDTA-PTCP筛选标准的样本采集血样于生化促凝管中，充分凝固后离心(3 000×g，离心10 min)，按照标准流程对生化指标进行检测。

2结果

2.13种方法检测血小板结果在30 700例标本中，初诊血小板低于100×109/L的有1 564例(5.09%)，血细胞分析仪报警血小板聚集有77例(0.25%)，经涂片复检，最终确定EDTA-PTCP为27例(0.09%)。其中7例血小板数值在正常范围内，显微镜下血小板呈5～10个聚集成簇分布于片中见图1A、C(见《国际检验医学杂志》网站主页“论文附件”)，20例血小板数值明显减少，显微镜下呈几十至上百个聚集成片状分布于尾部及边缘两侧见图1B、D(见《国际检验医学杂志》网站主页“论文附件”)，而在枸橼酸抗凝剂中则都呈均匀散在分布。经血细胞分析仪测定枸橼酸钠抗凝血血小板数量(182±64.3)×109/L与EDTA抗凝血血小板数量(74±31.2)×109/L比较差异有统计学意义(P<0.05)，而与手工计数血小板(183±63.3)×109/L比较差异无统计学意义(P>0.05)，见图2(见《国际检验医学杂志》网站主页“论文附件”)。

2.2EDTA-PTCP组和对照组生化指标分析两组总胆红素(TBiL)、尿素氮(Ure)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)比较差异无统计学意义(P>0.05)，而两组丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血糖(Glu)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)比较差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1　EDTA-PTCP组与对照组生化指标比较

3讨论

EDTA-PTCP是由EDTA抗凝剂引起的发生在体外的血小板聚集现象。目前认为EDTA引起血小板聚集的原因是由于存在能够识别血小板细胞膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)受体的EDTA依赖性自身抗体。正常情况下抗原抗体结合位点隐藏在复合物内部，当遇到EDTA 时，其位点发生改变，血小板被激活，导致聚集发生[9-10]。EDTA引起的血小板聚集程度并不相同，本实验中有20例血小板明显减少，7例血小板检测在正常范围，血涂片表现为局部聚集，而在枸橼酸钠抗凝剂中均无聚集现象，由此推断患者对EDTA的敏感度存在个体差异，这种差异与患者接受治疗的药物和自身疾病有关。有研究指出针对血小板GPⅡb/Ⅲa抗体的药物阿昔单抗能够引起约2%的患者发生EDTA-PTCP[11]，0.07%的恶性肿瘤患者接受化疗药物治疗后出现EDTA-PTCP[12]，国内也曾报道抗结核药物诱导EDTA-PTCP的发生[13]，而对于抗磷脂抗体阳性的自身免疫病患者其发生EDTA-PTCP概率要比健康者和同种疾病中抗磷脂抗体阴性的患者高[14]。出现EDTA-PTCP时一般更换抗凝剂就能解决，本文中27例更换抗凝剂后均未再发生血小板聚集。而对于某些患者枸橼酸钠、肝素等多种抗凝剂均能引起血小板聚集[15]，此时需要手工计数血小板。

虽然EDTA-PTCP与多种疾病状态有关，但至今未有证实哪种疾病能够直接引起该现象的产生。曾有针对健康人群EDTA-PTCP发生因素的调查[16]，而对住院患者EDTA-PTCP的危险因素尚未见报道。研究者对27例患者的生化指标进行了分析，并与50例体检健康者比较，发现两组ALT、Glu、TG、HDL间比较差异有统计学意义(P<0.05)。分析其原因，可能由于高三酰甘油血症时，肝脏脂代谢负担增加，肝细胞易受损，出现转氨酶增高，而且血液呈高凝状态，纤溶活性降低，血小板凝集性增高，易出现假性减少；长期高血糖易损伤血管内皮，导致血小板凝集不易解散[11]；而HDL作为公认的心血管保护因子，能促进胆固醇的逆转运和组织细胞内胆固醇的清除，减少高脂血症的发生。

EDTA作为抗凝剂在血常规分析中有着不可替代的优势，但同时也要注意EDTA-PTCP的发生。虽然EDTA-PTCP并非一种疾病状态，但会导致不必要的过度检查和治疗。虽然高血糖症、高脂血症可能与EDTA-PTCP的发生有关，但其作用机制还有待于进一步研究。

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Analysis of characters and biochemical profiles of 27 cases with EDTA-Dependent Pseudothrombocytopenia

YuMing,JinHailong,ZhangBaoqiu△

(DepartmentofClinicalLaboratory,BeijingChestHospitalaffiliatedtoCapitalMedicalUniversity/BeijingTuberculosisandThoracicTumorResearchInstitute,Beijing101149,China)

Abstract:ObjectiveTo analyze the characters about anticoagulation EDTA on the platelet aggregation,and discuss the risk factors about EDTA-PTCP by analyzing the biochemical parameters.Methods30 700 EDTA-K3 blood samples were collected from January 2014 to August 2015.WBC was performed using Sysmex XN-3000 and 27cases were identified of EDTA-PTCP.The blood samples of 27 subjects were recollected and WBC was repeated using EDTA-K3 and sodium citrate blood,respectively.Manual platelet counting and smear microscope examination on periphery blood were also performed.Biochemical parameters of 27 subjects with EDTA-PTCP were compared with 50 randomly selected non EDTA-PTCP controls.ResultsPlatelet counts in citrated blood were significantly higher than EDTA blood，the difference was statistically significant(P<0.05)，but similar to manual platelet counting(P>0.05).ALT，Glu and TG in patients with EDTA-PTCP were significantly higher than normal people,but HDL was significantly lower than control group,the difference was statistically significant(P<0.05).ConclusionEDTA-dependent pseudothrombocytopenia varies from people with different disease or using different medicine.It may be relative to hyperglycemia and hyperlipidemia.Another approach for rectifying,changing anticoagulant or manual platelet counting is a better way lead to correctly diagnose when EDTA-PTCP occurred.

Key words:ethylene diamine tetraacetic acid;pseudothrombocytopenia;platelet aggregation;hyperglycemia;hyperlipidemia

(收稿日期：2015-10-28)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.018

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)09-1200-03

作者简介：于明，女，检验医师，主要从事临床血液学研究。△通讯作者，E-mail：baoqiuzhang@sina.com。