萧结容，闵　玲，杨素冰，张其超

(广州医科大学附属肿瘤医院检验科，广东广州510000)



·论著·

前列腺癌患者血清人腺激肽释放酶2水平检测的临床价值

萧结容，闵玲，杨素冰，张其超

(广州医科大学附属肿瘤医院检验科，广东广州510000)

摘要:目的探讨血清人腺激肽释放酶2(hK2)的检测对于前列腺癌(PCa)患者早期诊断、预后判断和治疗手段的临床价值。方法选取2015年1～12月期间于广州医科大学附属肿瘤医院就诊的25例PCa患者和25例前列腺增生(BPH)患者及25例健康男性作为研究对象，通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫分析法(RIA)对hK2和前列腺特异性抗原(PSA)水平进行检测。另随机选取进行过根治性前列腺全切术的PCa组患者12例，检测并分析其手术前后hK2水平。 该文所得数据采用统计学软件SPSS21.0建模处理。结果PCa组、BPH组和健康组的hK2水平分别为(75.5±24.5)ng/L、(23.3±5.8)ng/L和(22.2±3.56)ng/L，PCa组明显高于BPH组和健康组，差异均具有统计学意义(P<0.05)；hK2检测PCa的特异度、准确度分别为89%和78%，25例PCa患者术后的hK2水平[(34.4±10.5)ng/L]与术前[(80.2±24.5)ng/L]相比较显著下降，差异有统计学意义(P<0.05)。结论hK2诊断PCa患者能有效提高其检测特异度，减少患者不必要的活检率，为患者的早期临床检测、预后判断和治疗提供了新的方向，前景值得进一步挖掘。

关键词:前列腺癌；人腺激肽释放酶2；前列腺特异性抗原；临床价值

前列腺癌(PCa)是男性生殖系统较常见的恶性肿瘤，随着年龄的增长患病的概率越大，早期症状不明显，使得早期诊断工作困难重重。目前，临床上进行PCa早期诊断尚未有万全之策，因此怀疑患有PCa的患者在没有病理诊断的情况下，必须承受前列腺活体组织检查之苦。近年来，随着医疗手段的不断进步，研究人员为发现准确度高、特异度强与PCa相关的分子生物学指标而不断做出努力，成为相关学者聚焦的重点。相关研究显示，与前列腺特异性抗原(PSA)一样，由前列腺上皮细胞产生的存在于血循环或组织中的人组织激肽释放酶(KLKs)出现异常及其与恶性肿瘤的形成和发展之间的关系这一课题，越来越引发相关学者的激烈讨论[1]。KLKs分泌至循环系统中的血清人腺激肽释放酶2(hK2)，极大可能促进PCa增长[2]，因此，对于PCa的筛选、分期和研究的准确度、特异度而言，正确检测hK2变得尤为重要。然而，现阶段对于此诊断方法争议较大，尚未成熟[3]。本研究通过hK2联免疫定量分析法来检测PCa、前列腺增生(BPH)患者和健康人的血清hK2水平，对血清hK2水平和PCa的相关性进行探讨，为PCa的早期诊断、预后判断和治疗提供有力依据。现将研究结果报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料选取2015年1～12月期间于广州医科大学附属肿瘤医院就诊的PCa患者25例(PCa组)、BPH患者25例(BPH组)及健康男性25例(健康组)作为研究对象。PCa组年龄60～82岁，平均年龄(69.3±5.2)岁，且根据2002年PCa AJCC分期标准，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期分别为2例、4例、7例和12例；BPH组患者25例，年龄53～80岁，平均年龄为(66.2±2.5)岁，且均符合以下标准：(1)PCa和BPH患者均进行病理诊断已证实；(2)均在直肠指诊检查前或检查后的1周、活检后2周进行采血；未因前列腺疾病而接受治疗；(3)均未接受过前列腺疾病的相关治疗。健康组年龄55～85岁，平均年龄为(70.8±7.6)岁。各组年龄间比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法分别抽取各组清晨空腹静脉血5 mL，3 h内分离血清，收集后集中检测hK2和PSA。另随机选取进行过根治性前列腺全切术的Pca组患者12例，检测并分析其手术前后的hK2水平。hK2检测通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、hK2单克隆抗体(hK2mAb)、hK2多克隆抗体(hK2pAb)、放射免疫分析法(RIA)、辣根过氧化物酶(HRP)标记抗IgG进行。操作步骤如下：组分配制的试剂盒，置于室温平衡30 min，加入50 μL hK2标准品，准备好空白对照组(10 g/L BSA/PBS)。稀释hK2 pAb 100 μL，每孔1∶2 000稀释量，37 ℃培育1 h；洗涤3次，加入1∶8 000稀释的HRP标记抗IgG每孔100 μL，均通过37 ℃培育1 h并洗涤3次。底物液每孔加入100 μL，避光显色15 min后每孔加入2.0 mol/L H2SO450 μL并终止反应，酶标仪450 nm波长读取各孔吸光度(A)值，根据曲线图绘制标准曲线。PSA检测方法为RIA，使用试剂盒为PSARIAkit药盒,厂家为天津九鼎医学生物工程有限公司,PSA正常参考值小于4.0 ng/mL，使用仪器为SN-695B型智能放免γ检测仪,厂家为上海核所日环光电仪器有限公司。

1.3统计学处理所有数据均采用SPSS21.0统计软件进行建模处理，相关分析方法采用均数t检验、方差分析、χ2检验和双变量，计数资料采用列联表计算比值比(OR)及其95%CI描述，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1各组hK2水平检测结果比较PCa组、BPH组和健康组的hK2水平分别为(75.5±24.5)ng/L、(23.3±5.8)ng/L和(22.2±3.56)ng/L，PCa组分别明显高于BPH组和健康组，差异具有统计学意义(t=0.688，P<0.05)。15例进行过根治性前列腺全切术的PCa患者在术前后需分别检测血清hK2水平3次，PCa患者术前和术后的血清hK2分别为(80.2±24.5)ng/L和(34.4±10.5)ng/L，其中术后有12例呈明显下降趋势，3例无明显变化，差异有统计学意义(t=5.258，P<0.05)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期PCa患者血清hK2水平分别为(76.2±24.6)ng/L、(65.2±33.5)ng/L、(82.2±22.8)ng/L和(83.2±25.5)ng/L，差异均无统计学意义(P>0.05)。BPH组和PCa组的血清PSA水平分别为(8.99±4.87)ng/mL和(43.5±28.3)ng/mL，可知上述两组的PSA水平均比正常参考值(<4.0 ng/mL)略高，其中PCa组的PSA水平明显高于PPH组，差异有统计学意义(t=7.380，P<0.05)。

表1　PCa患者血清hK2和 PSA 水平检测的诊断价值[%(n/n)]

通过比值比和95%CI得到hK2水平较高者患PCa的相对危险度，计算后显示与hK2水平低的患者相比，相对较高的PCa患者的相对危险度为15.45(95%CI：3.82～63.15，P<0.05)。通过血清hK2诊断后，PCa的ROC曲线下面积为0.657(95%CI：0.622～0.881)，标准误为0.064。由此可得，对于PCa的筛选、分期和研究的准确度、特异度而言，正确检测hK2变得尤为重要。

3讨论

大量研究显示，在循环系统中PSA和hK2可共存，两者在核苷酸序列上具有80%的同源性，都可由前列腺的上皮细胞表达且表达量最高[2,4-5]，其他组织相对较低，也许着两者之间存在着某种功能关系。大胆推测hK2极大可能促进PCa增长，成为PCa发病途径中不可或缺的因素。本研究PCa组大幅度高于BPH组和健康组，且BPH组hK2与健康组比较差异无统计学意义(P>0.05)。hK2的升高可能使PCa的危险性增高，对PCa的诊断有较高的准确度。研究中显示只用PSA检测PCa，优点在于灵敏度高，但特异度较低。相比虽然PCa组hK2升高的阳性率较低。PCa预后关系着患者到生活质量，成为临床关注的焦点。hK2对于PCa病理分级和分期评估指标存在重要指导作用。本研究显示，分期后的PCa组中血清hK2水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，而且与分期无明显的相关性。产生这一结果与相关报道不相符[6-10]，研究人员探讨后总结原因主要有以下几点：(1)hK2检测存在不同方式，有一定关联；(2)各组人员入组时的不同个体存在一定差异；(3)PCa的分期均为临床分期，可能导致分期误差。由于种种因素，使得研究结果未达到预期，也可能产生不同的新理论，都应在日后不断证实，加强相关研究的准确度。

参考文献

[1]Avgeris M,Mavridis K,Scorilas A.Kallikrein-related peptidases in prostate,breast,and ovarian cancers:from pathobiology to clinical relevance[J].Biol Chem,2012,393(5):301-317.

[2]毕学成，何慧婵，戴奇山，等．前列腺癌组织中人腺体激肽释放酶2基因表达值与Gleason评分的相关性分析[J]．中华生物医学工程杂志，2008，14(3)：208-210．

[3]Shariat SF,Scherr DS,Gupta A,et al.Emerging biomarkers for prostate cancer diagnosis,staging,and prognosis[J].Arch Esp Urol,2011,64(8):681-694.

[4]黄伟，吴培兴，陈晓军，等．骨特异性碱性磷酸酶联合前列腺特异性抗原检测在前列腺癌骨转移中的诊断意义[J]．现代实用医学，2015，27(10)：1283-1284．

[5]谢克俭，姜爱英，蔡强军，等．腺激肽释放酶2酶联免疫定量分析法的建立及其方法学研究[J]．中国免疫学杂志，2013，29(4)：416-418．

[6]罗亨全，江文聪，李本义．磷脂酰肌醇-3-磷酸激酶与前列腺癌研究进展[J]．国际泌尿系统杂志，2015，35(4)：597-601．

[7]杨瑜，陈明，朱伟东，等．两种方式前列腺癌根治术的临床差异分析[J]．国际泌尿系统杂志，2015，35(6)：804-807．

[8]张伟，张亚群，崔娣，等．老年人前列腺慢性炎症与前列腺癌及前列腺增生的相关性研究[J]．中华老年医学杂志，2015，34(5)：539-542．

[9]Liu M,Su HX,Wang X,et al.Association of prostate-specificantigen and digital rectalexamination with prostate cancer[J].Chin J Urol,2012,33(11):872-875.

[10]刘明，苏鸿学，王鑫，等．血清前列腺特异性抗原及直肠指检与前列腺癌的相关性研究[J]．中华泌尿外科杂志，2012，33(11)：872-875．

Clinical value of human kallikrein 2 detection on patients with prostate cancer

XiaoJierong,MinLing,YangSubing,ZhangQichao

(DepartmentofClinicalLaboratory,theAffiliatedCancerHospitalofGuangzhouMedicalUniversity,Guangzhou,Guangdong510000,China)

Abstract:ObjectiveTo study the clinical value of human kallikrein 2 detection on the early diagnosis,prognosis and therapeutic means of patients with prostate cancer.Methods25 patients with prostate cancer and 25 patients with benign prostatic hyperplasia who were treated in affiliated hospital of Guangzhou Medical University between January 2015 and December 2015 were selected as research objects.Their human kallikrein 2 and prostate specific antigen level were detected by ELISA and RIA.25 cases of prostatic cancer after operation of our hospital in synchronization were randomly selected as research objects and their human kallikrein 2 level was detected and analysed.All the data was modeling processed by SPSS21.0.ResultsHuman kallikrein 2 level of PCa group,BPH group and healthy group was(75.5±24.5)ng/L,(23.3±5.8)ng/L and(22.2±3.56)ng/L respectively,which of PCa group was higher than that of BPH group and healthy group.The difference had statistical significance(P<0.05).The specific and accuracy of hK2 detecting PCa was 89% and 78%.Compared with before operation[(80.2±24.5)ng/L],hK2 level of 25 patients with prostate cancer[(34.4±10.5)ng/L] significantly decreased and the difference had statistical significance(P<0.05).ConclusionOn diagnosing prostate cancer,human kallikrein 2 can improve specific detection,reduce unnecessary detected rate and provide the new direction for early clinical detection,prognosis and therapy.It deserves further promotion.

Key words:prostate cancer;human kallikrein 2;prostate specific antigen;clinical value

(收稿日期：2015-12-25)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.012

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)09-1186-02

作者简介：萧结容，女，主管技师，主要从事临床生化与免疫检验研究。