周　杰

(泸州医学院附属医院，四川 泸州 646000 )



全二维液相色谱的构建及其在鹿茸蛋白分离中的应用

周杰

(泸州医学院附属医院，四川 泸州 646000 )

[摘要]目的建立SAX-RP模式的在线二维液相色谱系统，并将其应用于鹿茸蛋白的分离、分析中。方法样品首先由第一维强阴离子交换色谱(COSMOGEL QA Glass Packed Column,75 mm×8.0 mm I.D)在pH 9.16的Tris-HCl缓冲体系中以0.8 mL/min的流速洗脱分离，采用不连续的逐步增加盐浓度的8步台阶梯度方式洗脱，洗脱产物富集在与反相柱相同填料的捕集柱顶端，通过阀切换将富集在捕集柱上的组分反向冲入第二维反相分析柱(Shodex Rspak RP18～415,150 mm×4.6 mm I.D)继续分析。结果鹿茸蛋白在所构建的二维系统上得到了较好的分离，与一维色谱相比，系统的总峰容量、分辨率在一定程度上得到了提高，系统总出峰数为30，总峰容量为240。结论使用常规尺寸的色谱柱构成的二维液相色谱系统仪器要求简单，对鹿茸为代表的动物类中药的分离、分析有一定指导意义。

[关键词]全二维液相色谱；鹿茸蛋白；SAX/RP

中药组成成分极其复杂，特别是中药中的动物药，常常含有几百甚至上千种组分。对复杂组份的分离，传统的色谱方法受到峰容量和分辨率的限制，远不能满足分离的要求，而组合不同模式构建多维系统是解决这一问题的有效途径。二维液相色谱由2种不同分离机理的液相色谱模式通过一定的切换接口构成，样品经第一维色谱分离后，由切换接口导入第二维色谱继续分离。二维液相色谱大大提高了整个系统的分辨率和峰容量，在蛋白质组学、药物分析中得到了广泛的应用[1-3]。……