王锐丽

摘 要：该研究将含嗜热乙醇菌β-葡萄糖苷酶A（Te-BglA）基因的重组质粒pET-20b-Te-BglA导入大肠杆菌JM109（DE3）中，经诱导表达和Ni2+亲和层析纯化，将其用于酶解大豆异黄酮，以染料木素的产量为检测指标，通过正交试验优化Te-BglA水解大豆异黄酮的条件。优化结果显示：最佳的水解条件为加酶量70U，温度80℃，水解时间60min，pH值7.4，在此条件下水解100g大豆粉可得到染料木素58.1mg。

关键词：β-葡萄糖苷酶；染料木素；大豆异黄酮糖苷；正交试验

中图分类号 TS201 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）18-0026-03

Hydrolysis of Soybean Isoflavone by β- Glucosidases A from Thermoanaerobacter etholicus

Wang Ruili

（Department of Biotechnology and Pharmaceutical Engineering，Xinyang Agriculture and Forestry University，Xinyang 464000，China）

Abstract：To obtain a high stability and efficiency enzyme in the biotransformation of isoflavone glycosides，β-glucosidase A from Thermoanaerobacter ethanolicus（Te-BglA）was over-expressed in Escherichia coli JM109（DE3），and purified by immobilized metal affinity chromatography. The hydrolysis conditions of soybean isoflavone by Te-BglA were by orthogonal test，Results were as follows：enzyme dose 70U，temperature 80℃，time 60min and pH 7.4. Under the optimal condition，the yield of genistein in the hydrolysis of 100g soybean powder was 58.1mg.

Key words：β-glucosidase；Genistein；Soybean isoflavone glucosides；Orthogonal test

大豆异黄酮因具有缓解更年期综合征、抗肿瘤、延缓衰老、抗辐射等功效而成为了国内外的研究热点[1-3]，目前研究发现的12种大豆异黄酮主要有游离型苷元和结合型糖苷两种类型，而被人体肠道吸收的是它的苷元形式，糖苷形式必须转化为相应的苷元才能真正发挥药效。大豆异黄酮糖苷水解酶（β-葡萄糖苷酶）水解或相关微生物发酵因条件温和而成为一种理想的转化途径[4-6]，目前虽有很多来源细菌或真菌转化大豆异黄酮糖苷β-葡萄糖苷酶的报道，但有关耐热性高效水解糖苷的β-葡萄糖苷酶的报道却很少。耐热性酶在生物转化过程中具有减少污染、加快反应速度、提高底物溶解度及易于大规模生产等优势[7]。本研究利用基因工程方法实现嗜热性β-葡萄糖苷酶A（Te-BglA）在大肠杆菌中的重组表达和纯化，通过正交试验对其酶解大豆粉中大豆异黄酮糖苷作用进行研究，以确定最佳酶解条件，以期为实际生产中提高苷元的产量提供一定的工艺参数。……