何奇松　陈磊　颜健华　许瑞胜　易春华　韦达有　冯淑萍　黄胜斌　梁晟　熊毅

摘要：【目的】通过原核表达并纯化获得O型口蹄疫病毒（FMDV）VP1基因及其多表位基因的重组蛋白，为建立O型FMDV抗体ELISA检测试剂盒及制备动物高免血清提供技术支持。【方法】以O型FMDV VP1全基因重组质粒pMD18-T-T-VP1及串联的VP1多表位基因重组质粒pMD18-T-O-VP1为模板，通过特异性引物扩增并回收目的基因，构建重组质粒pET-32a-VP1和pGEX-6p-1-VP1，然后转入大肠杆菌BL211（DE3）中诱导表达，并以SDS-PAGE和Western blotting对融合蛋白进行分析鉴定。【结果】O型FMDV的VP1基因及其多表位基因在大肠杆菌BL21（DE3）中得到正确表达，表达的两种融合蛋白主要以包涵体形式存在，纯度较高，且均能与猪抗O型FMDV阳性血清发生特异性结合，具有良好的反应原性。【结论】表达获得的融合蛋白具有良好的反应原性，可作为包被抗原应用于O型FMDV抗体检测试剂盒研发。

关键词： O型FMDV；VP1基因；多表位基因；原核表达；纯化；鉴定

中图分类号： S852.659.6 文献标志码：A 文章编号：2095-1191（2016）03-0472-06

0 引言

【研究意义】口蹄疫（Foot-and-mouth disease，FMD）已被列为A类动物传染病，是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus，FMDV）引起的一种高度接触性传染病（Sobrino et al.，2001；颜健华等，2015）。FMDV可感染多种偶蹄动物，传播迅速，感染率高，一旦暴发将造成重大的经济损失，许多国家高度重视对该病的研究。自2010年起，我国及周边国家相继发生O型FMD疫情（何继军等，2015），且与A型、Asia1型呈交替流行趋势，涉及面广、破坏性强（刘畅等，2013）。因此，加强FMD疫情监测及预警预报，对有效防控FMD及促进我国畜牧业健康发展具有重要意义。【前人研究进展】组成FMDV衣壳的主要结构蛋白有4种，分别为VP1、VP2、VP3和VP4（Collen et al.，1991）。……