郑峙云，张茂婷，蒋晓静，陈培胜，王举涛，桂双英,3,4

(1.安徽中医药大学药学院，安徽 合肥　230012；2.安徽济人药业有限公司，安徽 亳州　236000；3.安徽省中医药科学院药物制剂研究所，安徽 合肥　230012；4.大别山区农林特色产业协同创新中心，安徽 合肥　230012)



山茱萸配方颗粒的质量研究

郑峙云1，张茂婷1，蒋晓静1，陈培胜2，王举涛1，桂双英1,3,4

(1.安徽中医药大学药学院，安徽 合肥230012；2.安徽济人药业有限公司，安徽 亳州236000；3.安徽省中医药科学院药物制剂研究所，安徽 合肥230012；4.大别山区农林特色产业协同创新中心，安徽 合肥230012)

[摘要]目的建立山茱萸配方颗粒的质量控制方法。方法采用薄层色谱法对山茱萸配方颗粒中马钱苷进行定性鉴别，采用高效液相色谱法测定山茱萸配方颗粒中马钱苷含量。结果薄层色谱法能定性检出马钱苷，斑点清晰、分离度好；马钱苷质量浓度在5～80 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9)，平均加样回收率为102.12%，RSD为2.46%(n=6)。结论所建立的方法可行，可用于山茱萸配方颗粒的质量控制。

[关键词]山茱萸；配方颗粒；马钱苷；薄层色谱法；高效液相色谱法

山茱萸为山茱萸科植物山茱萸(CornusofficinalisSieb.et Zucc.)的干燥成熟果肉[1]，是40种用量较大的重点中药材之一。现代研究表明，山茱萸主要含有环烯醚萜、鞣质、黄酮、有机酸及其酯类、糖类、氨基酸和挥发性成分等，具有降血糖、延缓衰老、抗心律失常等药理作用[2]。

中药配方颗粒是以中药饮片为原料，采用现代技术提取、浓缩、干燥、制粒而成的中药免煎颗粒[3]。与传统中药汤剂相比较，具有质量稳定、疗效可靠、便于生产、服用方便等优点[4]。笔者分别采用薄层色谱法、高效液相色谱法对山茱萸配方颗粒进行定性鉴别和含量测定研究，以期有效控制山茱萸配方颗粒的质量。

1材料

1.1仪器JJ200B型分析天平：美国双杰兄弟江苏常熟有限公司；DZF-6050型真空干燥箱：上海博迅实业有限公司；岛津LC-20A高效液相色谱仪(包括SPD-M20A紫外检测器、LC-20AB泵、LC-solution色谱工作站)：日本岛津；KQ2200超声波清洗器：江苏省昆山市超声仪器有限公司；托盘天平：浙江省慈溪市华徐衡器实业有限公司；YP1002电子天平：上海佑科仪器仪表有限公司；SHB-3循环水式多用真空泵：河南省郑州长城科工贸有限公司；HH-S2系列恒温水浴锅：江苏省金坛市环宇科学仪器厂；WFH-203三用紫外分析仪：上海精科实业有限公司。

1.2试药马钱苷对照品：成都瑞芬思生物科技有限公司，纯度99.9%，批号 M-010-110311；熊果酸对照品：成都曼斯特生物科技有限公司，纯度99.9%，批号 MUST-13020602；硅胶G薄层板：青岛海洋化工厂分厂，规格100 mm×100 mm；点样毛细管：上海长城科学仪器商店；10批山茱萸配方颗粒：安徽济人药业有限公司，批号 1310081～1310090。

2方法与结果

2.1薄层色谱鉴别取本品颗粒2 g，加无水乙醇10 mL，超声处理(功率200 W，频率40 kHz)15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取马钱苷对照品，加无水乙醇制成1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。按照2010年版《中华人民共和国药典》附录ⅥB薄层色谱试验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸(50∶10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显示相同的紫红色斑点，见图1。

注：1～5和7～11为山茱萸配方颗粒；6为马钱苷对照品。

图1山茱萸配方颗粒薄层色谱图

2.2含水量测定根据2010年版《中华人民共和国药典》一部“颗粒剂”项下水分测定法(附录Ⅸ H)，按照山茱萸药材和饮片水分的第一法测定。方法如下：取本品2 g，平铺于干燥至恒质量的扁形称量瓶中，厚度不超过5 mm；疏松供试品不超过10 mm；精密称定，打开瓶盖在105 ℃干燥5 h，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30 min，精密称定，再在105 ℃干燥1 h，冷却，称质量，至连续两次称质量的差异不超过5 mg为止。根据减失的质量，计算供试品中含水量，含水量不超过6.0%。结果见表1。

表1　10批山茱萸配方颗粒水分测定

2.3含量测定

2.3.1色谱条件色谱柱：Phenomenex C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(15∶85)，检测波长：240 nm；流速1.0 mL/min；柱温：25 ℃。按马钱苷峰计理论板数应不低于3 000。色谱图见图2。

2.3.2对照品溶液的制备精密移取“2.1”项下马钱苷对照品溶液1 mL，加80%甲醇稀释制得100 μg/mL马钱苷溶液，即得。

图2对照品(A)和供试品(B)的高效液相色谱图(1.马钱苷)

2.3.3供试品溶液的制备取本品颗粒约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇25 mL，精密称定质量，超声(功率200 W，频率40 kHz)1 h，放冷，再精密称定质量，用80%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.4线性关系考察分别精密吸取马钱苷对照品(100 μg/mL)0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mL置10 mL量瓶中，加80%甲醇稀释定容，配成浓度分别为5、10、20、40、60、80 μg/mL的马钱苷对照品系列溶液。取上述对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按“2.3.1”项下色谱条件测定，记录峰面积。以马钱苷浓度(x)为横坐标，峰面积(y)为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：y=34 982x+3 552.4，r=0.999 9(n=6)。结果表明，马钱苷在5～80 μg/mL的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.5精密度试验精密吸取马钱苷对照品溶液(40 μg/mL)10 μL，重复进样6次，依法测定，记录峰面积。结果RSD=1.34%，说明该方法精密度良好。

2.3.6重复性试验称取同一批山茱萸颗粒(批号 1310088)6份，各0.1 g，精密称定。按“2.3.3”项下方法制备样品溶液，依法测定，记录峰面积，计算RSD值，结果RSD=1.83%，说明该方法重复性良好。

2.3.7稳定性试验取山茱萸颗粒(批号 1310088)0.1 g，精密称定，按“2.3.3”项下方法制备样品溶液，分别于0、1、2、4、8、12 h进样10 μL，测定马钱苷峰面积，计算RSD值，结果RSD=1.89%，表明12 h内供试品溶液稳定性良好。

2.3.8加样回收率试验称取已知含量的山茱萸颗粒(批号 1310088)6份、各0.05 g，精密称定。分别加入马钱苷对照品溶液(100 μg/mL)4 mL，按“2.3.3”项下方法制备样品溶液，分别精密吸取10 μL进样，依法测定，计算回收率与RSD，结果见表2。

表2　山茱萸配方颗粒中马钱苷

2.3.9样品测定取10批山茱萸配方颗粒，按“2.3.3”项下方法制备样品溶液，分别精密吸取10 μL进样，依法测定并计算含量，结果见表3。

表3　山茱萸配方颗粒中马钱苷含量测定(n=3)

3讨论

笔者通过薄层色谱法对配方颗粒进行定性鉴别，参照2010年版《中华人民共和国药典》一部“山茱萸”项下方法，可以有效鉴别出配方颗粒中马钱苷，但未能检出熊果酸。笔者曾进行了多方面的探索研究，包括改变供试品溶液制备方法，如加大溶剂量，改变提取溶剂，延长提取时间，增加提取次数，以及改变展开条件，结果均未鉴识出熊果酸。推测其原因可能在于： 提取过程是一个热处理过程，加热可能使熊果酸成分发生分解，导致含量很低，低于薄层鉴别的检测限，最终无法鉴识出熊果酸； 熊果酸不溶于水，而配方颗粒的提取溶剂为水，未有效提取出熊果酸。

此外，山茱萸配方颗粒还应符合2010年版《中华人民共和国药典》一部制剂通则颗粒剂项下有关的各项规定。在质量控制评价方面，现行的中药配方颗粒质量标准多采用薄层色谱和对单一成分进行检测。中药是多成分的整体作用，由于中药配方颗粒已失去饮片的形态，在质量控制上缺少饮片性状和显微鉴别的重要指标，因此在质量标准制定中必须加强专属性鉴别和整体性质量控制[5]。本研究采用高效液相色谱法建立了山茱萸配方颗粒中马钱苷的测定方法，稳定性好，操作简单，可有效用于山茱萸配方颗粒产品的质量控制。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京:中国医药科技出版社, 2010:26-27.

[2]张亚军,高云艳.山茱萸化学成分与药理研究概况[J].中国中医药信息杂志,2002,9(10):81-82.

[3]谢靖屹.中药配方颗粒特点分析[J].广州医药,2011,42(2):40-42.

[4]李松林,宋景政,徐宏喜.中药配方颗粒研究浅析[J].中草药,2009,40(S1):1-7.

[5]何翊,粟华生,温庆伟，等.中药配方颗粒质量标准研究浅析[C].中药与天然药高峰论坛暨第十二届全国中药和天然药物学术研讨会.海口：中国药学会中药和天然药专业委员会,2012:339-343.

A Study of Quality ofFructusCorniFormula Granule

ZHENGZhi-yun1,ZHANGMao-ting1,JIANGXiao-jing1,CHENPei-sheng2,WANGJu-tao1,GUIShuang-ying1,3,4

(1.CollegeofPharmacy,AnhuiUniversityofChineseMedicine,AnhuiHefei230012,China; 2.AnhuiJirenPharmaceuticalCorporation,AnhuiBozhou236000,China; 3.InstituteofPharmaceutics,AnhuiAcademyofChineseMedicine,AnhuiHefei230012,China; 4.CollaborativeInnovationCenterofAgri-forestryIndustryinDabieshanArea,AnhuiHefei230012,China)

[Abstract]ObjectiveTo establish a method for quality control of Fructus Corni Formula Granule. MethodsThin-layer chromatography (TLC) and high-performance liquid chromatography were used for qualitative identification and content determination of loganin in Fructus Corni Formula Granule, respectively. ResultsLoganin could be detected by TLC. On TLC, the spots of loganin were clear and well separated. The concentration of loganin showed a good linear relationship with peak area within 5-80 μg/mL (r=0.999 9). The average recovery rate was 102.12%, and the relative standard deviation was 2.46% (n=6). ConclusionThe method is feasible for quality control of Fructus Corni Formula Granule.

[Key words]Fructus Corni; Formula Granule; Loganin; Thin-layer chromatography; High-performance liquid chromatography

(收稿日期：2015-07-23；编辑：张倩)

[中图分类号]R283[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2016.02.027

通信作者：桂双英，guishy0520@126.com

作者简介：郑峙云(1970-)，女，实验师

基金项目：安徽省科技攻关项目(15011d04005)