李烨（平阳县食品药品检验检测中心，浙江平阳325401）



高效液相色谱法同时测定果酱中12种添加剂

李烨
（平阳县食品药品检验检测中心，浙江平阳325401）

摘要：建立果酱中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红和赤藓红12种添加剂的高效液相色谱测定法。采用ZORBAX SB-C18柱，以甲醇和0.02 mol/L乙酸铵为流动相进行梯度洗脱，二极管阵列检测器变波长（230nm和254nm）检测，外标法定量。方法的回收率为85.7 %～115.1 %，RSD小于5.0 %。该法操作简单、快速、准确，适用于果酱中常见添加剂的同时测定。

关键词：高效液相色谱法；果酱；添加剂

果酱是人们生活中常见的食品。为了保持或增加果酱的色、香、味等品质，提高防腐效果，延长保存时间，常常加入多种添加剂。然而市场上滥用这类添加剂的违法行为时有发生，滥用食品添加剂对人体有一定的毒害作用，因此我国食品安全国家标准对果酱的添加剂添加量有严格的规定[1]。目前，对果酱中多种添加剂同时测定方法的研究比较少。建立简单、快速、准确的方法测定果酱中食品添加剂非常必要。本试验采用梯度洗脱，可变波长程序，建立用于同时检测果酱中12种食品添加剂的高效液相色谱法。

1　材料与方法

1.1仪器

Agilent 1260型高效液相色谱仪（配二极管阵列检测器）：美国安捷伦；SK5210HP型恒温超声清洗器：上海科导超声仪器有限公司；离心机：上海卢湘仪器离心机仪器有限公司；PHS-25型数显pH计：上海精密科学仪器有限公司。

1.2试剂

甲醇（色谱纯）：德国默克公司；乙酸铵（分析纯）：上海试四赫维化工有限公司；氨水：西陇化工股份有限公司；苯甲酸、山梨酸、糖精钠、柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、赤藓红：中国计量科学研究院；安赛蜜、新红：农业部环境保护科研监测所；酸性红：Dr. Ehrenstorfer GmbH公司。

1.3色谱条件

色谱柱：ZORBAXSB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流速：1.0 mL/min；柱温：35℃；进样量：10 μL；检测波长：安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠230 nm；柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、赤藓红254nm；流动相：0.02 mol/L乙酸铵/甲醇，洗脱梯度见表1。

表1　梯度洗脱表Table 1 Program of gradient elution

1.4样品处理

称取5.0 g样品，加水溶解，在50℃下超声20 min，用氨水调节pH至7，用水定容至25 mL，离心（5 000 r/min）10 min，经0.45 μm滤膜过滤，供HPLC进行检测。

2　结果与讨论

2.1检测波长的选择

国家标准推荐使用的测定波长分别为安赛蜜214 nm[2]，糖精钠、山梨酸和苯甲酸230 nm[3]，柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、新红、赤藓红254 nm[4]，诱惑红和酸性红254 nm[5]，本方法经反复试验，采用变波长检测，选择230 nm测定安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠；其余8种色素在254 nm下测定，以提高方法灵敏度。

2.2色谱柱的选择

比较了不同类型和长度的C18色谱柱的分离效果。考察了Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、ZORBAX SB-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）3种色谱柱对于目标化合物的分离效果。Eclipse XDB所得的峰形较宽，完全分离目标化合物需要35 min，无法满足快速检测需求。ZORBAX SB-C18（150 mm）在20 min完成分离，但分离度较差。ZORBAX SB-C18（250 mm）所得峰形尖锐且分离度好，其色谱分离如图1所示。

图1　12种食品添加剂标准溶液色谱图Fig.1 Chromatogram of 12 food additive standards solution

25 min内完成目标化合物的分离满足快速检测需求。因此选择ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱进行检测。

2.3标准曲线和检出限

逐级稀释的标准混合工作液按试验的色谱条件分别进行测定，以浓度（X，mg/L）为横坐标，以其相应的峰面积（Y，mAU*s）为纵坐标，绘制标准曲线得线性回归方程。以3倍信噪比计算方法检出限，结果见表2。

表2　12种添加剂的线性范围、回归方程、相关系数及检出限Table 2 Linear ranges，regression equations，correlation coefficients and detection limit of 12 additives

2.4方法的回收率和精密度

在样品中添加3个浓度的12种食品添加剂，每个添加水平重复测定6次，计算平均加标回收率和精密度（RSD），结果见表3。

表3　样品中12种添加剂的回收率与精密度（n=6）Table 3 Recovery and precision of 12 additives（n=6）

续表3样品中12种添加剂的回收率与精密度（n=6）Continue table 3 Recovery and precision of 12 additives（n=6）

试验结果表明，各组分平均回收率范围在85.7 %～115.1 %，精密度（RSD）为0.21 %～4.88 %。方法的精密度和准确度能满足实际样品检测分析的要求。

3　结论

本试验采用蒸馏水超声波辅助提取，高效液相色谱检测分离和定量果酱中常见的12种食品添加剂，本方法回收率和精密度符合检测要求。方法操作简单，速度快，提高了工作效率可应用于实际样品的检测。

参考文献：

[1]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.GB 2760-2014食品安全国家标准食品添加剂使用标准[S].北京:中国标准出版社,2014:4-113

[2]中华人民共和国卫生部,中国国家标准化管理委员会.GB/T 5009.140-2003饮料中乙酰磺胺酸钾的测定[S].北京:中国标准出版社,2003:206

[3]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,中国国家标准化管理委员会.GB/T 23495-2009食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定高效液相色谱法[S].北京:中国标准社,2009:3

[4]中华人民共和国卫生部,中国国家标准化管理委员会. GB/T 5009.35-2003食品中合成着色剂的测定[S].北京:中国标准出版社,2003:278

[5]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.SN/T 1743-2006食品中诱惑红、酸性红、亮蓝、日落黄的含量检测高效液相色谱法[S].北京:中国标准出版社,2006:2

Simultaneous Determination of 12 Additives in Jam by High Performance Liquid Chromatography

LI Ye
（Pingyang Inspection Center for Food and Drug，Pingyang 325401，Zhejiang，China）

Abstract：An analytical method for the determination of additives including acesulfame potassium，benzoic acid，sorbic acid，sodium saccharin，tartrazine，new red，amaranth，ponceau 4R，sunset yellow，allura red，carmoisine，erythrosine in jam was developed by HPLC methods. The 12 additives in jam were separated on ZORBAX SB-C18 column by using methanol and 0.02 mol/L ammonium acetate as mobile phase，detector（DAD）

at 230 nm and 254 nm respectively. The quantification was performed by the external standard method. The extraction recoveries were between 85.7 %-115.1 % and the RSD all less than 5.0 %.This method was found to be simple，rapid and accurate，and can be used for the simultaneous determination of common additives in jam.

Key words：high performance liquid chromatography；jam；additives

收稿日期：2016-01-21

作者简介：李烨（1986—），女（汉），助理工程师，本科，从事食品质量安全的检测工作。

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.08.038