肖雪 于天泉

哈药集团制药六厂 150000

超高效液相色谱法测定罗红霉素分散片的溶出度

肖雪 于天泉

哈药集团制药六厂 150000

目的：利用超高效液相色谱法测定罗红霉素分散片的溶出度。方法：使用AgilentXDB-C18的色谱柱，流动相是磷酸二氢铵溶液(用三乙胺调pH值至7.5)-乙腈(50∶50)，检测的波长是205nm，流动相的流速是0.65mL/min，而且柱温是35℃。结果：这种方法有着较好的专属性，浓度还要在25.2¯225.2μg/mL的这一范围内，浓度和峰面积有着良好的线性关系，R2=0.999而且罗红霉素的平均回收率为99.5%，RSD达到了0.93%。结论：这种方法是极为便捷的，也较为简单，重复性和准确性都较好，可以用于罗红霉素分散片溶出度的测定。

超高效液相色谱法；罗红霉素分散片；溶出度

罗红霉素是一种大环内酯类抗生素，罗红霉素分散片的溶出度在检查方法上主要是利用高效液相色谱法，但是还没有使用超高效液相色谱法来进行罗红霉素分散片溶出度的研究，超高效液相色谱法主要是用于药品行业进行分析，因此要根据超高效液相色谱法的特点来进行罗红霉素分散片溶出度的测定，这样就可以快速的实现药品的检测。本文就是对超高效液相色谱法测定罗红霉素分散片溶出度进行分析，为相关的研究提供借鉴。

一、仪器与试药

超高效液相色谱仪使用的是Agilent1200超高效液相色谱仪，药物溶出仪是天津大学的智能药物溶出仪。

罗红霉素分散片的样品主要是由四川科伦药业提供的，罗红霉素分析所使用的试剂是乙腈，罗红霉素的对照品是EP标准的，批号是00BV47，色谱用水是自制的纯化水，而其他的试剂是分析纯，所有的仪器都要达到标准，满足基本的试验需要，否则就会影响到试验的效果。

二、方法与结果

（一）色谱条件

使用的色谱柱是AgilentXDB-C18色谱柱，标准是50mm×4.6mm，1.8μm，流速是0.65mL/min，流动相是0.067mol/L磷酸二氢铵溶液-乙腈，要用三乙胺将 pH值调到 7.5，柱温为 35℃，检测的波长是205nm，进样量为10μL。

（二）溶出度的测定方法

在进行溶出度测定的时候，需要按照2015年版的《中国药典》进行溶出度的测定。溶出介质是醋酸盐缓冲液，pH值为5.5（取醋酸钠溶液0.04moL/L,利用冰醋酸进行调节，将醋酸盐缓冲液的pH值调到5.5），需要缓冲液900mL为溶出介质，依法操作，转速为100r/min，在经过了45min时，就要将溶液取出适量进行过滤，取续滤液作为供试品溶液，另取罗红霉素的对照品适量，经过了精密的称定之后，加溶出介质进行溶解并且定量稀释，稀释成为约0.16mg/ml的溶液，这一溶液就是对照品溶液，在这样的情况下，就可以按照相应的色谱条件进行上述两种溶液的测定，进样量为10μl，将其注入到液相色谱仪中，并且要对色谱图进行记录和分析，使用外标法对峰面积进行计算，这样就可以得到每片的溶出度。

（三）方法学验证

1.辅料干扰试验

在进行罗红霉素分散片干扰试验的时候，要按照罗红霉素分散片处方比例来称取样品，样品是不含有主药的空白辅料，进行精密的称定后，在里面加入醋酸盐缓冲液适量，并且利用超声震荡的方式进行稀释，定容到相应的浓度，还要进行摇匀和滤过处理，续滤液要按照相应的色谱条件进行测定，在此条件下，空白辅料会在1min内出峰，这样的试验方式是不会影响样品测定的。

2.专属性试验

取罗红霉素分散片适量，仔细研磨成细粉，精密称取适量，相当于罗红霉素50mg，放入50ml的容量瓶中，之后就可以分别的按照以下的条件进行破坏：（1）碱破坏：要加入5ml的氢氧化钠溶液，氢氧化钠溶液必须要达到 0.1mol/L的浓度，将其放下室温下，放置30min，之后利用0.1mol/L的盐酸溶液5ml进行中和，之后向里面加入流动相进行溶解，就可以将其稀释为0.16mg/mL的相应溶液。（2）酸破坏：加入0.1mol/L的盐酸溶液5mL，于室温放置30min，用0.1mol/L的氢氧化钠溶液 5mL中和至中性，加流动相溶解并稀释制成约含0.16mg/mL的溶液。（3）氧化破坏：加入30%的过氧化氢溶液5mL，于室温放置30min，加流动相溶解并稀释制成约含0.16mg/mL的溶液。（4）高温破坏：在105℃条件下放置2h，取出冷却至室温，加流动相溶解并稀释制成约含0.16mg/mL的溶液。（5）光照破坏：在照度为(4500±500)lx的条件下放置 10d，加流动相溶解并稀释制成约含0.16mg/mL的溶液。

按上述色谱条件分别进样测定，结果表明，罗红霉素分散片在各破坏条件下均明显产生降解产物，各降解峰与罗红霉素能有效分离，且主峰均为单峰(峰纯度参数均在999以上)，该法专属性较强。

3.线性关系与范围

取罗红霉素对照品适量，精密称定，加醋酸盐缓冲液(pH5.5)溶解并稀释制成浓度分别为25.2、50.4、81.5、100.7、162.9和225.2μ g/mL的溶液，摇匀，进行色谱条件测定，记录色谱图。以罗红霉素浓度(μg/mL)为横坐标(x)，以主峰峰面积为纵坐标(y)，做线性回归计算，得出回归方程：y=2941.2x+3036.8；R2=0.9999。结果表明，罗红霉素在25.2～225.2μg/mL(相当于测定浓度的15%—140%)范围内，其浓度与峰面积呈良好的线性关系。

4.对照品重复性与供试液稳定性

取罗红霉素对照品溶液，按色谱条件进样10μL，重复测定6次的峰面积RSD为0.48%。取供试品溶液，分别于0，1，2，4，8，12和24h进样考察，结果表明，24h内主峰面积没有明显变化，供试品溶液稳定。

5.回收率实验

按处方比例分别精密称取相当于样品标示量的50%，80%，100%和120%的主药及相应量的空白辅料，加醋酸盐缓冲液(pH5.5)适量，振摇使罗红霉素溶解，并加醋酸盐缓冲液(pH5.5)稀释至规定浓度，摇匀，滤过，取续滤液按以上色谱条件测定，平均回收率为99.5%，RSD为0.93%(n=12)。

6.溶出曲线的绘制

取本品，在5，10，15，20，45和60min时，分别取溶液5mL滤过，取续滤液作为供试品溶液，并及时在溶出杯中补充溶出介质5mL。另取罗红霉素对照品适量，精密称定，用上述溶出介质溶解并稀释制成0.16mg/mL的溶液，作为对照品溶液。将上述2种溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算每片在不同时间的溶出度。实验结果见表1和图1。

表1 6个时间点溶出度考察试验结果

图1 罗红霉素分散片溶出曲线

三、讨论

测定方法比较

在本品溶出度研究过程中发现，以《中国药典》的溶出度测定色谱条件进行测定，罗红霉素主峰的保留时间约15min，而UPLC方法的主峰保留时间约为 5min，即将原来溶出度测定的工作量缩减为1/3左右。在当前国家高度重视药品质量的大环境下，溶出曲线对比将成为固体制剂质量评价的一个重要指标，将会有越来越多的企业开展仿制药一致性评价工作，采用UPLC法测定本品的溶出度，将极大地缩短了分析时间，有利于高效、快速、准确的开展该项工作，必将大大减少成本，促进节能环保，应用前景广阔。

[1]洪利娅,孙晓明,王建.高效液相色谱法测定罗红霉素片与罗红霉素分散片溶出度[J].医药导报,2011,30(2):251-253

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].2015年版.北京:中国医药科技出版社，2015:651-652.

S567.23+9

A

1672-5018（2016）12-152-01