钱卫东， 周颖欣， 吴启航， 蔡长龙

(1.陕西科技大学 食品与生物工程学院， 陕西 西安　710021； 2.西安工业大学 光电工程学院， 陕西 西安　710021)



一种基于PCR技术快速筛选低能离子注入重组菌株的方法

钱卫东1， 周颖欣1， 吴启航1， 蔡长龙2

(1.陕西科技大学 食品与生物工程学院， 陕西 西安710021； 2.西安工业大学 光电工程学院， 陕西 西安710021)

摘要：为拓展基于低能离子注入介导药用植物基因组DNA转化酵母、构建能生产天然产物的酵母重组菌的广泛应用，以目标产物龙胆苦苷生物合成途径中的关键酶基因(GGPPS，MECPS和MECT)为分子筛选标记，以基于低能离子注入随机转化重组菌DNA为模板进行PCR扩增，实现对其高通量初筛，利用HPLC方法对初筛所得菌株发酵产物进行分析检测.结果，从1 072株转化酵母菌中初筛出12株候选酵母重组菌，经HPLC复筛后，其中5株重组酵母菌的发酵产物中检测出龙胆苦苷.研究表明，此PCR筛选方法，具有高效、简单、周期短、廉价、易于操作等优点，适用于低能离子注入介导基因组DNA大分子随机转化酵母，构建能生物合成天然产物的酵母重组菌的研究中.

关键词：PCR快速筛选； 低能离子注入； 关键酶； 重组酵母菌

0引言

龙胆苦苷(Gentiopicroside)，为倍半萜属裂环环烯萜苷类化合物，是中药药用植物秦艽(Gentiana Macrophylla Pall.)的主要次生代谢产物，研究表明，龙胆苦苷具有重要的药理作用，其单一化合物粉针剂秦龙苦素，属中药一类新药，在黄疸型病毒性肝炎的治疗方面具有显著的疗效[1-3].但随着临床的需求量逐渐增加，秦艽野生资源……