王　楠，潘　喆，袁　宏

(大连医科大学附属第一医院：1.检验科；2.病理科，辽宁大连 116023)



·论著·

抑制性差减杂交技术分离白血病多药耐药基因

王楠1，潘喆2△，袁宏1

(大连医科大学附属第一医院：1.检验科；2.病理科，辽宁大连 116023)

摘要:目的分离及鉴定与白血病多药耐药性相关的差异表达基因。方法采用抑制性差减杂交(SSH)技术分离非耐药细胞株K562与耐药细胞株K562/DOX差异表达基因。提取总RNA，逆转录合成cDNA，经限制性内切酶RsaⅠ酶切后，分别与不同的接头(adopter1和adopter2R)连接；连接产物插入pMD19-T载体后转入大肠埃希菌中，构建cDNA差减文库；挑取阳性克隆提取质粒进行测序及同源序列分析，确定差异表达基因。结果筛选获得220个差异表达基因，包括血红蛋白、核糖体和线粒体等相关基因，以及热休克因子结合蛋白(HSPB1)基因等其他基因。结论采用SSH技术及分子克隆技术可构建耐药及非耐药肿瘤细胞株差异表达基因的差减cDNA文库，能够为进一步筛选、克隆肿瘤细胞多药耐药性相关差异表达基因奠定基础。

关键词:白血病；多药耐药；抑制性差减杂交；差异表达基因

白血病细胞多药耐药是导致化疗效果减低或治疗无效的主要原因，而耐药基因过度表达是肿瘤细胞形成耐药性的基础。研究白血病耐药细胞基因表达的差异，可获知细胞出现表型差异的原因，提供复杂生命过程的基本信息[1]。本研究采用抑制性差减杂交(SSH)技术构建非耐药白血病细胞株K562与耐药细胞株K562/DOX差异表达基因的cDNA文库[2]，为筛选白血病耐药基因，揭示白血病多药耐药的形成机制奠定基础。……