何　伟　陈　欢　陈卫民

湖北职业技术学院医学院　湖北孝感　432000；①华中科技大学同济医院



Cyclin D1、Ki-67在口腔黏膜白斑和口腔鳞癌中的表达

何伟陈欢陈卫民①

湖北职业技术学院医学院湖北孝感432000；①华中科技大学同济医院

[摘要]①目的探讨Cyclin D1、Ki-67在口腔黏膜白斑和口腔鳞癌中的表达及意义。②方法免疫组化SP法检测10例正常口腔黏膜、12例上皮单纯增生性黏膜白斑、23例上皮不典型增生性白斑、42例口腔鳞癌组织中的Cyclin D1、Ki-67蛋白表达情况，使用SPSS 17.0 软件包对数据进行统计学处理。③结果Cyclin D1在上皮不典型增生性白斑和口腔鳞癌蛋白阳性表达率为39.1%、42.9%，显著高于上皮单纯增生性白斑 (16.7%)和正常口腔黏膜(10.0%)，差异具有统计学意义(P<0.05)；Ki-67在上皮不典型增生性白斑和口腔鳞癌蛋白阳性表达率为78.3%、90.5%，显著高于上皮单纯增生性白斑(41.7%)和正常口腔黏膜(30.0%)，差异具有统计学意义(P<0.05)；Cyclin D1在口腔鳞癌中的表达与肿瘤分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05)，与临床分期无关(P>0.05)，Ki-67在口腔鳞癌中的表达与肿瘤分化程度、临床分期及淋巴结转移均有关(P<0.05)；Cyclin D1与Ki-67在口腔鳞癌组织中的表达呈正相关。④结论Cyclin D1、Ki-67在上皮不典型增生性白斑和口腔鳞癌中的高表达提示二者在口腔黏膜白斑的癌变和口腔鳞癌的发生发展中起重要作用。

[关键词]Cyclin D1Ki67口腔黏膜白斑口腔鳞癌

口腔黏膜白斑(Oral Leukoplakia，OLK)好发于中老年男性，上皮组织增生是其主要病理特点，是口腔黏膜最常见的癌前病变，约有3%～5%的白斑会发展为口腔鳞癌[1](Oral squamous cell cancer,OSCC)。OSCC是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤。Cyclin D1是较早发现的原癌基因，主要影响细胞周期调控，可促进细胞周期G1-S期的转换，使细胞增殖。Ki-67是反映组织增殖活性的核抗原，其异常表达见于很多恶性肿瘤报道，但在OLK和OSCC中的表达情况报道还不多。本研究采用免疫组化SP法对OLK和OSCC组织中Cyclin D1和p27蛋白表达进行检测，旨在探讨OLK的癌变机制和Cyclin D1、Ki-67在OSCC发生、发展中的作用及临床意义。

1资料与方法

1.1临床资料所有标本均来自华中科技大学同济医院病理科存档的蜡块。OLK标本35例，其中12例上皮单纯增生性白斑、23例上皮不典型增生性白斑；不同病理分级的OSCC标本42例，所有OSCC患者术前均无放化疗史，术后经过病理科确诊。42例OSCC标本按病理组织分化程度分为高～中分化28例，低分化14例；临床分期T1～T2期20例，T3～T4期22例；伴颈淋巴结转移24例，无转移18例。取口腔整形手术中的10例正常口腔黏膜作为正常对照。患者年龄52～76岁，中位年龄61岁。

1.2主要试剂与方法鼠抗人Cyclin D1单克隆抗体、鼠抗人Ki-67核抗原单克隆抗体、即用型SP超敏试剂盒、DAB显色剂、PBS缓冲液、防脱片剂等购自武汉博士德生物科技公司。标本经4%甲醛固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片3张，石蜡切片采用高压修复抗原，免疫组化SP法染色，操作步骤按SP试剂盒说明书进行，DAB显色，所有染色均设阳性及阴性对照。

1.3结果评定由2名高级职称的病理医师盲法阅片，在200倍光镜下随机选取5个背景和染色清楚的部位进行图像分析，计数100个细胞，取其平均值。按照Cyclin D1和Ki-67阳性细胞数占视野中总细胞数的百分比计数。Cyclin D1和Ki-67蛋白染色阳性信号均为细胞核出现棕黄色颗粒状着色为标准，着色细胞数量≤10%为阴性(-)；着色细胞数量>10%为阳性(+)。

1.4统计学处理采用SPSS 17.0软件包进行统计分析，对数据进行t检验、χ2检验、Spearman等级相关分析，P<0.05认为差异有统计学意义。

2结果

2.1Cyclin D1、Ki-67蛋白在不同组织类型中的表达情况Cyclin D1、Ki-67蛋白均阳性表达于细胞核，正常口腔黏膜组织中Cyclin D1、Ki-67阳性表达于上皮基底层；上皮单纯增生性白斑中的Cyclin D1、Ki-67阳性细胞数量增多，渐向基底上层阳性表达；上皮不典型增生性白斑中Cyclin D1、Ki-67阳性表达从基底层向表层推移；鳞癌组织中Cyclin D1、Ki-67阳性细胞分布于癌巢周围，散在分布于全层，见图1、2、3、4、5、6。

图1正常口腔黏膜中Cyclin D1蛋白的表达 (SP×200)

图2上皮不典型增生性白斑Cyclin D1蛋白的表达 (SP×200)

图3口腔鳞癌中Cyclin D1蛋白的表达 (SP×200)

图4正常口腔黏膜中Ki-67蛋白的表达 (SP×200)

图5上皮不典型增生性白斑Ki-67蛋白的表达 (SP×200)

图6口腔鳞癌中Ki-67蛋白的表达 (SP×200)

2.2Cyclin D1、Ki-67蛋白阳性表达口腔鳞癌和上皮不典型增生性白斑中Cyclin D1、Ki-67阳性率均明显高于正常口腔黏膜组、上皮单纯增生性白斑组，差异有统计学意义(P<0.05)，上皮不典型增生性白斑组高于上皮单纯增生性白斑，差异有统计学意义(P<0.05)；口腔鳞癌组高于上皮不典型增生性白斑组、上皮单纯增生性白斑组高于正常口腔黏膜组，但差异均无统计学意义(P>0.05)；见表1。

2.3Cyclin D1、Ki-67蛋白表达与OSCC的临床病理参数关系Cyclin D1蛋白在OSCC中的表达与肿瘤的分化程度、有无淋巴结转移有关，差异有统计学意义(P<0.05)，与肿瘤的临床分期无关，差异无统计学意义(P>0.05)；Ki-67蛋白在OSCC中的表达与肿瘤的分化程度、临床分期、有无淋巴结转移有关，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表1　Cyclin D1、Ki-67蛋白在不同组织类型中的表达

注：与正常口腔黏膜组、上皮单纯增生性白斑组比较，△P<0.05；上皮不典型增生性白斑组与上皮单纯增生性白斑组比较，*P<0.05

表2　Cyclin D1、Ki-67蛋白表达与OSCC临床病理参数关系

2.4CyclinD1与Ki-67在OSCC中表达的相关性在OSCC组中，CyclinD1、Ki-67蛋白表达均阳性者17例，均阴性者1例；CyclinD1蛋白表达阳性，Ki-67蛋白表达阴性者1例；CyclinD1蛋白表达阴性，Ki-67蛋白表达阳性者12例。经Spearman等级相关统计分析，在OSCC中CyclinD1与Ki-67的表达呈正相关。

3讨论

OLK组织病理学上分为上皮单纯性增生和上皮不典型增生，上皮不典型增生是较常见的癌前病变，易发展成为OSCC，赵今等报道上皮异常增生患者癌变率为21.67%[2]。OSCC的预后较差，5年生存率不足60%[3]。口腔黏膜从正常组织发展到OLK、OSCC是多因素造成的，其病理过程是多阶段、多步骤的连续过程，细胞增殖正向调控因子的增强和细胞增殖负向调控因子的减弱与此过程有关。

Cyclin D1是重要的细胞周期调控蛋白，主要调控细胞周期G1期，是一种重要的原癌基因，其过度表达已在多种恶性肿瘤中有报道[4～7]，在细胞周期中Cyclin D1与CDK4和CDK6形成复合体，导致Rb蛋白磷酸化，促进G1/S期转移，在这个过程中致癌因子与Cyclin D1相互作用使细胞分裂生长失控以致癌变，当Cyclin D1蛋白高表达时，提示细胞有可能异常增殖甚至癌变。本组资料显示，Cyclin D1作为一种原癌基因，在正常组织、上皮单纯性增生白斑、上皮不典型增生白斑、OSCC表达率分别为10.0%、16.7%、39.1%、42.9%呈逐渐升高趋势，提示Cyclin D1可能在OLK的癌变中起了一定的作用。Cyclin D1的高表达是OSCC的重要分子事件，本研究发现Cyclin D1的高表达与患者的肿瘤部位、临床分期等因素无关，但与细胞的分化程度、淋巴结的转移有明显的相关性，低分化组Cyclin D1蛋白阳性表达率明显高于高中分化组，转移组明显高于未转移组，提示Cyclin D1可能在OSCC发展中起重要作用。

Ki-67是目前应用较多的增殖细胞标记物，除了Go期不表达，Ki-67在细胞繁殖的每个阶段都有表达，细胞有丝分裂后Ki-67丢失抗原决定簇，迅速降解，其半衰期较短，检测结果可靠，可较好地反映细胞的增殖活性。Ki-67在乳腺癌、食管鳞状细胞癌、阴茎鳞状细胞癌等恶性肿瘤中的高表达均有报道[8～10]，Ki-67高表达对肿瘤的扩散转移及预后有重要影响，本组资料显示，在口腔正常黏膜、单纯性增生白斑、上皮不典型增生白斑、OSCC组织中Ki-67阳性表达率分别为30.0%、41.7%、78.3%、90.5%，阳性表达呈逐渐升高趋势，本研究发现，Ki-67蛋白在OSCC中的表达与肿瘤的分化程度、临床分期、有无淋巴结转移有关，差异具有统计学意义，说明以上因素可能影响Ki-67在肿瘤组织中的表达，因此Ki-67抗原的检测对于判断OSCC的临床性质及预后具有一定的参考价值，为合理制订临床治疗计划提供了依据，本组资料显示，Cyclin D1和Ki-67蛋白在OSCC中的表达呈正相关，说明二者在OSCC发生发展过程相互影响，协调作用。

综上所述，Cyclin D1、Ki-67在中老年人口腔黏膜组织中的高表达提示患者有口腔癌前病变及转化为OSCC的可能性，应提高警惕，密切随访；在OSCC组织中联合检测Cyclin D1、Ki-67蛋白有助于了解OSCC的生物学行为，可以为患者早期诊断和干预治疗提供分子生物学支持。

参考文献

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(岳静玲编辑)

Expression and significance of cyclin D1 and Ki-67 in oral leukoplakia and oral squamous cell carcinoma

HEWei，CHENHuan，CHENWeimin

(DepartmentofStomatology,HubeiVocationalandTechnicalCollege,HubeiXiaogan432000,China)

[ABSTRACT]ObjectiveTo study the expression and significance of cyclin D1and Ki-67 in oral leukoplakia and oral squamous cell carcinoma.MethodsImmunohistochemistry of SP method was used to detect the expression of 10 cases of normal oral mucosa,12 cases of simple epithelial hyperplasia type leukoplakia,23 cases of atypical epithelial proliferative leukoplakia,42 cases of oral squamous cell carcinoma of cyclin D1 and Ki-67 protein expression,using SPSS 17.0 software package was used for data processing.ResultsCyclin D1 in epithelial dysplasia leukoplakia and oral squamous cell carcinoma positive expression rate was 39.1%,42.9%,it was significantly higher than that of simple hyperplastic leukoplakia(16.7%) and normal oral mucosa(10%),the difference was statistically significant(P<0.05);Ki-67 in epithelial dysplasia and oral squamous cell carcinoma of white spot protein positive expression rate was 78.3%,90.5%,it was significantly higher than that of simple hyperplastic leukoplakia(41.7%) and normal oral mucosa(30%),the difference was statistically significant(P<0.05);Cyclin D1 in oral squamous cell carcinoma and the expression of tumor differentiation and lymph node metastasis(P<0.05),but not with clinical stage(P>0.05),Ki-67 in oral squamous cell carcinoma and the expression of the degree of tumor differentiation,clinical stage and lymph node metastasis(P<0.05);Cyclin D1 and K-i 67 in oral squamous cell carcinoma was positively correlated.Conclusion the high expression of cyclin D1 and Ki-67 in epithelial dysplasia leukoplakia and oral squamous cell carcinoma,which suggests that the two plays an important role in the development of oral leukoplakia and oral squamous cell carcinoma.

[KEYWORDS]Cyclin D1.Ki-67.Oral leukoplakia.Oral squamous cell carcinoma

[中图分类号]R 739.8

[文献标识码]A

[文章编号]2095-2694(2016)02-139-04

【通讯作者】陈卫民。

【作者简介】何伟(1971-)，男，医学硕士，副教授、副主任医师。研究方向：口腔颌面肿瘤。