齐丽敏，张学玲，孙波，公春兰，冯晔

(1沧州医学高等专科学校，河北沧州061001；2沧州市人民医院)



宫颈细胞HPV DNA检测与hTERC、HER-2、c-myc基因检测对CINⅠ自然转归的预测效能

齐丽敏1，张学玲2，孙波2，公春兰1，冯晔1

(1沧州医学高等专科学校，河北沧州061001；2沧州市人民医院)

摘要：目的比较宫颈细胞HPV DNA检测与人端粒酶基因(hTERC)、人类表皮生长因子受体2(HER-2)、c-myc基因检测对宫颈上皮内瘤样病变Ⅰ级(CINⅠ)自然转归的预测效能。方法 初诊为CINⅠ的患者43例，采用PCR检测宫颈细胞HPV DNA，荧光原位杂交技术(FISH)检测hTERC、HER-2和c-myc基因，分别于就诊后6、12、18、24个月对43例患者进行定期随访。随访12、24个月时再次行高危型HPV检测。随访结束对患者进行阴道镜下病理活检。分析并比较HPV DNA、hTERC、HER-2、c-myc基因检测结果对CINⅠ自然转归的预测效能。结果43例患者失访3例，寿命表法得出平均随访41.3例，随访24个月后，病变自然消退31例(75.1%)、病变持续7例(16.9%)、进展2例(4.8%)。初次就诊HPV DNA检测阳性者与阴性者的病变进展率(持续/进展)差异无统计学意义(P>0.05)；随访12、24个月时HPV持续阳性者病变进展率高于阴性者(HPV转阴者+持续阴性者)，HPV DNA持续阳性者病变持续/进展率高于阴性者(P<0.05，RR=3.75，95%CI：1.245~11.299)。初诊hTERC、HER-2、c-myc基因阳性者病变持续/进展率均高于阴性者(P均<0.05，RR分别为4.735、4.306、4.667，RR的95%CI分别为1.121~20.007、1.454~12.746、1.392~15.645)。结论 CINⅠ患者初诊时宫颈细胞HPV DNA检测结果与病变进展无关，持续监测可提示病变进展情况；初诊时hTERC、HER-2、c-myc基因检测阳性者宫颈病变有较大进展可能。

关键词：人乳头瘤病毒；人端粒酶基因；人类表皮生长因子受体2；c-myc；宫颈上皮内瘤变；宫颈癌前病变；宫颈脱落细胞学检测

目前研究[1]认为，宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CINⅠ)的转归多数倾向于逆转，只有小部分会进展为更高级别的病变。美国阴道镜与宫颈病理学会(ASCCP)共同制定的宫颈癌前病变处理指南建议CINⅠ可以随访观察为主。宫颈癌前病变和早期宫颈癌的筛查及寻找预测CINⅠ转归的可靠指标是宫颈癌研究领域的热点。2013年9月~2015年9月，本研究比较了宫颈细胞HPV DNA检测与人端粒酶基因(hTERC)、人类表皮生长因子受体2(HER-2)、c-myc基因检测对CINⅠ自然转归的预测效能，为CINⅠ的处理提供参考。

1资料与方法

1.1临床资料CINⅠ患者43例，年龄27~55岁, 均为已婚或有性生活史妇女。纳入标准：①病理诊断为单纯CINⅠ，不合并局部病灶CINⅡ及以上；②既往无宫颈癌和CIN病史；③既往无阴道镜活检史及宫颈物理治疗或手术史；④非妊娠期妇女；⑤无自身免疫性疾病、肝肾慢性疾病及其他慢性疾病；⑥同意进行随访观察，并签署知情同意书。

1.2宫颈细胞中HPV DNA、hTERC、HER-2、c-myc基因检测使用专用宫颈脱落细胞采集器在宫颈外口顺时针旋转3~5圈，将刷子置入3 mL宫颈细胞保存液中，放入4 ℃冰箱保存。检测23种HPV DNA，包括18种高危型(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83)和5种低危型(HPV6、11、42、43、81)。采用荧光原位杂交法(FISH)检测宫颈细胞中的hTERC、HER-2、c-myc基因。扩增异常细胞判断标准：单个间期细胞核中绿色信号≥2个、红色信号>2个表示hTERC、HER-2基因有扩增；单个间期细胞核中红色信号>2个表示c-myc基因有扩增。

1.3随访方法分别于就诊后6、12、18、24个月对43例患者进行随访。随访12、24个月时再次行高危型HPV检测。随访结束对患者进行阴道镜下病理活检。将每次随访检查结果录入个人随访档案。对于随访中途行宫颈物理治疗或手术的患者，自治疗之日起将其剔除随访名单。

1.4统计学方法采用SPSS18.0软件进行统计处理。计数资料比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1CINⅠ患者随访结果43例患者随访12个月时失访1例，18个月时失访2例，至随访结束时共失访3例，失访率为6.98%。随访中无行宫颈物理治疗或手术的患者。寿命表法得出随访24个月获得随访41.3例、病变自然消退率为75.1%(31/41.3)、病变持续率16.9%(7/41.3)、进展率4.8%(2/41.3，全部进展为CINⅡ)。

2.2宫颈细胞HPV DNA检测结果与CINⅠ自然转归的关系43例CINⅠ患者初诊时测宫颈细胞HPV DNA阳性29例(67.4%)，随访中HPV DNA阳性者失访1例，HPV DNA阴性者失访2例；随访24个月时初诊检测HPV DNA阳性者病变持续/进展8例、消退20例，HPV DNA阴性者病变持续/进展1例、消退11例，两者病变进展率(持续/进展)差异无统计学意义(P>0.05)。随访12、24个月时再次行HPV DNA检测，HPV DNA持续阳性者病变持续/进展5例、消退5例，HPV DNA转阴者分别为3、15例，HPV DNA持续阴性者分别为1、11例，HPV DNA持续阳性者病变进展率高于阴性者(HPV转阴者+持续阴性者)，HPV DNA持续阳性者病变持续/进展的风险是阴性者的3.75 倍(P<0.05，RR=3.75，95%CI：1.245~11.299)。

2.3宫颈细胞hTERC、HER-2、c-myc基因检测结果与CINⅠ自然转归的关系初诊hTERC、HER-2、c-myc基因阳性者病变持续/进展率均高于阴性者(P均<0.05，RR分别为4.735、4.306、4.667，RR的95%CI分别为1.121~20.007、1.454~12.746、1.392~15.645)。详见表1。

表1　宫颈细胞hTERC、HER-2、c-myc基因

3讨论

从CIN进展至宫颈癌需经历较长过程，对宫颈病变进行筛查、及早发现癌前病变是防治宫颈癌的关键环节，对降低宫颈癌发病率有重要价值[2]。由于CINⅠ病变存在自然消退、持续存在和病变进展不同的转归，如果能预测CINⅠ是否会发生进展，临床处理将更有针对性。目前对CINⅠ自然转归的相关研究较多，多数学者认为CINⅠ在不进行临床干预的情况下自然消退率较高[3~6]。

本研究发现CINⅠ患者初次就诊时宫颈细胞HPV DNA检测结果对病变进展无预测价值，这与大部分妇女感染HPV后多能自行清除病毒有关。而随访12、24个月时HPV DNA持续阳性者病变进展率高于阴性者，提示高危型HPV持续感染与CINⅠ的持续/进展相关，这也意味着高危型HPV DNA检测如需作为宫颈病变的筛查手段，需经过长期随访与监测，结果才更为可靠[7,8]，而多次重复检查势必会给患者带来经济和心理双重压力，所以有必要寻找其他可靠的指标和检测方法。

国外研究发现，高危型HPV感染后，宫颈组织端粒酶激活，而c-myc基因对端粒酶的激活起关键作用，参与CIN和宫颈癌的发生[9]。HPV16 E6所编码的蛋白可诱导细胞增殖和分化，使抑癌基因p53失活，最终导致宫颈癌的发病[10]。HER-2表达可通过HPV16 E6调节，推测HER-2基因转录或翻译后的调控可能在宫颈癌发病中起一定作用。FISH技术具有安全、快速、高灵敏度、无创等特点，不仅能显示细胞中期分裂相，还能显示间期细胞核，许多国内外学者[11~14]借助FISH技术检测相关基因进行宫颈癌筛查，但关于用该技术检测hTERC、HER-2、c-myc基因预测CINⅠ自然转归的报道较少见[15,16]。本研究结果显示，CINⅠ患者初诊时宫颈细胞hTERC、HER-2、c-myc基因阳性表达率分别为42.5%、22.5%和30.0%，高于国外报道，可能与本研究纳入患者的年龄、居住环境、生活习惯差异等有关系。我们发现，hTERC、HER-2、c-myc基因阳性者CINⅠ病变进展的风险分别为阴性者的4.74、4.31、4.67倍，而HPV DNA持续阳性者病变进展的风险为HPV DNA阴性者的3.75倍，提示hTERC、HER-2、c-myc基因作为CINⅠ持续/进展的预测指标较重复的HPV DNA检测效能更佳[8]。至于hTERC、HER-2、c-myc基因检测中哪项对CINⅠ转归预测效能最好，还需扩大样本长时间深入研究。

参考文献：

[1] Rashid S, Khaund A, Murray LS, et al. The effects of uterine artery embolisati-on and surgical treatment on ovarian function in women with uterine fibroids[J]. BJOG, 2010,117(8):985-989.

[2] 张蕾,赵计端.液基薄层细胞学结合TBS系统对宫颈癌筛查的临床意义[J].现代预防医学,2013,40(1):35-37.

[3] 厉宣英,何君梅.高危型HPV DNA负荷量在预测CINⅠ转归可能性中的价值[J].潍坊医学院学报,2015,37(4):300-302.

[4] 黄建珍,钱小泉,张品南,等.Ⅰ级宫颈上皮内瘤变转归与HPV感染相关性研究[J].现代医药卫生,2014,30(3):431-432.

[5] 江维,李隆玉.宫颈上皮内瘤变Ⅰ级的自然转归与随访观察[J].实用癌症杂志,2009,24(2):188-190.

[6] 荣晅,乌兰娜,高积勇,等.宫颈上皮内瘤变Ⅰ级的自然转归研究[J].现代妇产科进展,2012,21(5):365-368.

[7] Katki HA, Kinney WK, Fetterman B, et al. Cervical cancer risk for women un-dergoing concurrent testing for human papillomavirus and cervical cytology:a p-opulation-based study in routine clinical practice[J]. Lancet Oncol, 2011,12(7):663-672.

[8] 李凌,江维,曾四元,等.荧光原位杂交技术检测hTERC基因预测宫颈上皮内瘤样病变Ⅰ级自然转归的前瞻性研究[J].中国肿瘤临床,2013,40(1):25-28.

[9] Andersson S, Sowjanya P, Wangsa D, et al. Detection of genomic amplificationof the haman telomerase gene TERC,a potential marker for triage of women with HPV-positive,abnormal Pap smears[J]. Am J Pathol, 2009,175(5):1831-1847.

[10] Narisawa-Saito M, Handa K, Yugawa T. HPV16 E6-mediated stabilization of ErbB2 in neoplastic transformation of human cervical keratinocytes[J]. Oncogene, 2007,26(21):2988-2996.

[11] 齐丽敏,杨青,冯晔,等.TCT联合HPV及hTERC、HER-2和c-myc基因在宫颈高度病变筛查中的价值研究[J].现代肿瘤医学,2015,23(15):2180-2183.

[12] 齐丽敏,孙波,张学玲,等.hTERC、HER-2和c-myc基因在宫颈异常细胞中的表达及意义[J].实用医学杂志,2015,31(18):79-81.

[13] Kuglik P, Kasikova K, Smetana J, et al. Molecular cytogenetic analyses of hT-ERC(3q26) and MYC(8q24) genes amplifications in correlation with ongenenic human papillomavirus infection in Czech patients with cervical intraepithelial n-eoplasia and cervical carcinomas[J]. Neoplasma, 2015,62(1):130-139.

[14] Li T, Tang L, Bian D, et al. Detection of hTERC and c-myc genes in cervical epithelial exfoliated cells for cervical cancer screening[J]. Int J Mol Med, 2014,33(5):1289-1297.

[15] 刘聃,魏力.hTERC基因、c-myc基因表达在宫颈病变中的意义[J].现代诊断与治疗，2012,23(4):300-301.

[16] 朱园园,冯定庆,沈国栋，等.FISH检测两种基因在宫颈癌筛查中的价值[J].检验医学与临床,2014,11(15):2065-2067.

(收稿日期：2015-10-26)

中图分类号：R737.33

文献标志码：B

文章编号：1002-266X(2016)07-0042-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.07.015

基金项目：沧州市科学技术局规划项目(141302003)。