陈结慧 祝胜郎 叶 玲 朱恒梅 蒋 莹 李就鸿

(深圳市第六人民医院肾内科，广东 深圳 5108052)

·论著·

蛋白质非酶糖基化终产物对足细胞自噬与凋亡的影响

陈结慧 祝胜郎*叶 玲 朱恒梅 蒋 莹 李就鸿

(深圳市第六人民医院肾内科，广东 深圳 5108052)

目的:探讨蛋白质非酶糖基化终产物(AGEs)作用下人足细胞自噬和凋亡发生情况及可能的信号转导通路。方法:体外培养永生化人足细胞，以AGEs 100 mg/L分别不同时间(0、4、8、12、24 h)刺激足细胞。Western blotting检测足细胞自噬标记性蛋白微管相关蛋白1B轻链3 -II/I(LC3- II/I)、自噬相关基因Atg5、哺乳动物雷帕霉素靶点受体(mTOR)信号通路相关蛋白p70 S6 激酶1(p-p70 S6 Kinase，p70 S6 Kinase)表达水平；荧光显微镜观察自噬溶酶体形成标志蛋白溶酶体膜蛋白(LAMP2a)；AnnexinⅤ/7-AAD双染流式细胞术检测足细胞早期和晚期凋亡。结果: ①与0 h相比，100 mg/L AGEs刺激后足细胞LC3B- II/I表达水平在4、8、12、24 h均明显下降(P<0.05)；Atg5蛋白表达水平在8、12、24 h均明显下降(P<0.05)，在12 h下降达到最高峰；p-p70 S6 Kinase水平在4、8、12 h升高(P<0.05)，在12 h达峰，在24 h再次下降；②免疫荧光染色结果显示，与0 h相比，100 mg/L AGEs刺激足细胞12 h LAMP2a表达明显减少；③与0 h相比，100 mg/L AGEs刺激后足细胞发生早期凋亡+晚期凋亡比例在4、8、12、24 h逐渐增加(P<0.05)，在12 h达峰(14.07%)。结论: AGEs刺激下人足细胞自噬减少，凋亡增加，伴随着mTOR/p70 S6 Kinase信号通路激活。AGEs可能通过mTOR/p70 S6 Kinase信号通路途径调节足细胞自噬与凋亡，从而导致足细胞损伤。

足细胞；自噬；凋亡；糖尿病肾病

足细胞的损伤和丢失是糖尿病肾病(DN)的主要病理改变之一。自噬和凋亡是调节细胞存活和死亡的两种不同方式，在体内呈一个动态平衡的过程，共同决定细胞的命运。已有研究表明，自噬在肾脏损伤中起保护作用[1]。在糖尿病肾病动物模型中，观察到肾脏固有细胞自噬的减少，凋亡的增加，提示自噬异常参与了糖尿病肾病的发病机制[2-3]。然而，进一步的体外研究及相关信号通路的研究鲜有报道。蛋白质非酶糖基化形成的晚期糖基化终产物(AGEs)在介导慢性高血糖致DN 的发生发展中发挥着重要作用。本研究拟通过体外培养人肾脏足细胞，探讨AGEs刺激下人足细胞自噬和凋亡发生的情况及可能的作用通路,为进一步明确糖尿病肾病的发病机制提供依据。……