开蕾，张二春，彭钧

(安庆市立医院，安徽安庆246003)



膀胱尿路上皮癌组织CD44V6、GATA-3的表达变化及与肿瘤病理分级的关系

开蕾，张二春，彭钧

(安庆市立医院，安徽安庆246003)

摘要：目的观察膀胱尿路上皮癌组织CD44变异体6(CD44V6)、鸟嘌呤腺嘌呤胸腺嘧啶腺嘌呤序列结合蛋白3(GATA-3)的表达变化，探讨其与膀胱尿路上皮癌病理分级的关系。方法 采用免疫组化Envision法检测120例膀胱尿路上皮癌组织、60例尿路上皮增生组织CD44V6、GATA-3蛋白的表达，分析不同病理分级膀胱尿路上皮癌组织中二者阳性表达的差异。结果膀胱尿路上皮癌组织、尿路上皮增生组织中CD44V6蛋白阳性表达率分别为49%(59/120)、13%(8/60)，GATA-3蛋白阳性表达率分别为95%(114/120)、62%(37/60),二者CD44V6、GATA-3蛋白阳性表达率比较差异有统计学意义(P均<0.05)。不同病理分级膀胱尿路上皮癌组织中CD44V6、GATA-3蛋白阳性表达率比较差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 膀胱尿路上皮癌组织CD44V6、GATA-3蛋白阳性表达率升高，且肿瘤病理分级越高二者阳性表达率越高。

关键词：膀胱尿路上皮肿瘤；CD44变异体6；鸟嘌呤腺嘌呤胸腺嘧啶腺嘌呤序列结合蛋白3

近年来随着膀胱镜技术的广泛应用，尿路上皮癌的检出率逐渐上升，但膀胱镜往往取材较少，在鉴别膀胱尿路上皮癌和尿路上皮增生时常遇到困难。探索与发病相关的肿瘤标志物，提高早期诊断水平并采取有效治疗措施是成功治疗膀胱尿路上皮癌的关键。细胞黏附分子CD44变异体6 (CD44V6)参与了多种恶性肿瘤的增殖及转移过程，在多种恶性肿瘤组织中均表达异常。鸟嘌呤腺嘌呤胸腺嘧啶腺嘌呤序列结合蛋白3 (GATA-3)是细胞内重要的锌指转录因子，参与了细胞的增殖、分化、转移和凋亡等生理或病理过程。本研究采用免疫组化法检测膀胱尿路上皮癌组织CD44V6、GATA-3表达，探讨其与膀胱尿路上皮癌病理分级的关系。

1资料与方法

1.1临床资料选择本院2011年1月~2015年9月经病理检查确诊的膀胱尿路上皮癌组织标本120例(患者男94例、女26例，年龄33~78岁、平均56岁，依据1999版WHO的尿路上皮癌分类标准进行病理分类，分为Ⅰ级(52例)、Ⅱ级(50例)、Ⅲ级(18例)、尿路上皮增生组织标本60例(患者男45例、女15例，年龄42~64岁、平均53岁)，二者性别、年龄比较差异无统计学意义。

1.2膀胱尿路上皮癌组织、尿路上皮增生组织中CD44V6、GATA-3蛋白表达检测采用免疫组化Envision两步法。一抗选用CD44V6、GATA-3单克隆抗体，试剂均购自福州迈新生物技术公司。10%中性缓冲甲醛固定，石蜡标本切片3 μm,常规脱蜡至水化；抗原修复；高压锅120 ℃保压8 min, 自来水缓冲10 min，冷却至室温；3% H2O2封闭内源性过氧化物酶，室温10 min；分别加入即用型CD44V6、GATA-3单克隆抗体，于37 ℃培养箱孵育1 h；PBS缓冲液(pH 7.4)冲洗3次，每次3 min；滴加Envision两步法试剂盒二抗，37 ℃培养箱孵育15 min；PBS缓冲液(pH 7.4)冲洗3次，每次3 min；DAB显色2 min，Mayer苏木素复染，逐级乙醇脱水，中性树胶封片，镜下观察。结果判定：选择6个有代表性的视野，每个视野计数30个细胞，取平均值。细胞无着色为0分、淡棕色为1分、中等棕色为2分、深棕色为3分；阳性细胞百分比<5%为0分、5%~<25%为1分、25%~<50%为2分、50%~<75%为3分、≥75%为4分；以上两项评分相加>0分为阳性。

1.3统计学方法采用SPSS19.0统计软件。计数资料比较用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1膀胱尿路上皮癌组织、尿路上皮增生组织中CD44V6、GATA-3蛋白阳性表达比较 膀胱尿路上皮癌组织、尿路上皮增生组织中CD44V6蛋白阳性表达率分别为49%(59/120)、13%(8/60)，GATA-3蛋白阳性表达率分别为95%(114/120)、62%(37/60),二者CD44V6、GATA-3蛋白阳性表达率比较差异有统计学意义(P均<0.05)。

2.2不同病理分级膀胱尿路上皮癌组织中CD44V6、GATA-3蛋白阳性表达比较 病理分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级的膀胱尿路上皮癌组织中CD44V6蛋白阳性表达率分别为21.2%(11/52)、64%(32/50)、88.9%(16/18)，GATA-3蛋白阳性表达率分别为63.4%(33/52)、90%(45/50)、100%(18/18)，不同病理分级膀胱尿路上皮癌组织中CD44V6、GATA-3蛋白阳性表达率比较差异有统计学意义(P均<0.05)。

3讨论

CD44属Ⅰ类膜蛋白，是一类介导细胞与细胞或细胞与细胞外基质之间产生相互黏附作用的细胞黏附分子。其在人体组织中分布极为广泛，主要参与细胞与细胞、细胞与基质之间的特异性粘连过程，从而维持组织与器官的基本结构。其中异构体 CD44V6 与肿瘤浸润和转移密切相关。CD44V6蛋白参与了细胞的增殖、分化、转移及凋亡等过程，在多种恶性肿瘤中都异常表达。研究发现CD44V6在卵巢黏液性腺癌中表达异常，具有促进肿瘤癌变和进展的作用，且可作为药物干预肿瘤增殖的靶点[1]。研究也发现CD44V6蛋白参与了结肠癌细胞的凋亡过程，且可作为预测肿瘤复发和评价治疗效果的重要标志物[2]。安慧敏[3]也证实CD44V6蛋白在结直肠癌和结直肠腺瘤组织中高表达，且可作为临床诊断和治疗的重要蛋白分子。CD44V6蛋白高表达可作为乳腺癌和直肠癌发病的重要标志物[4，5]，也与患者的预后密切相关。这与 CD44V6 在同型细胞间黏附作用有关，细胞-细胞、细胞-基质间黏附性的丧失可能会促使肿瘤逆分化及肿瘤细胞侵袭，导致肿瘤远处转移[6]。本研究结果发现，随着膀胱尿路上皮癌分级的升高，CD44V6蛋白从基底层细胞向靠近膀胱腔表面细胞延伸，分级越高，阳性表达率越高，说明膀胱尿路上皮癌组织中CD44V6的表达与病理分级有显著相关性。

GATA3属于 GATA 转录因子家族，是高度特异的膀胱癌标志物[7]。近年来研究发现，GATA3 在多种恶性肿瘤细胞的生长调节和分化中起重要作用，并与肿瘤的分级和预后关系密切[8]。GATA3 是CD4+辅助性T细胞Tp 类细胞因子的特异性转录因子， 促进抗体的产生、介导体液免疫应答，对抗细胞外的病原体，可以抑制抗肿瘤免疫的功能。Th1/Tp失衡，特别是Tp 细胞数量增多，功能亢进,可以导致多种恶性肿瘤的发生。GATA3调控Tp细胞的分化过程，为控制与治疗某些疾病提供了新的靶点[9~11]。本研究发现，120例膀胱尿路上皮癌组织与60例尿路上皮增生组织相比，GATA3在膀胱尿路上皮癌组织中阳性表达为95%，而在尿路上皮增生组织阳性表达仅为62%，GATA3蛋白阳性表达率越高，肿瘤分级越高。因此研究GATA3的表达调控与功能，既能深化人们在分子水平上对CD4+辅助性T细胞分化机制的了解，也能拓宽相关疾病治疗的思路，为临床用药及预后提供实验依据。

综上所述，CD44V6、GATA-3中蛋白阳性表达率越高，肿瘤细胞恶性增殖活性和转移能力越强，预示患者预后不良。CD44V6、GATA-3在膀胱尿路上皮癌和尿路上皮增生鉴别诊断中具有重要价值。

参考文献：

[1] 栾磊.G蛋白耦联受体、CD44v6和E-cadherin在卵巢黏液性腺癌中的表达及意义[J].中国老年学杂志,2014,12(24):7040-7042.

[2] 申炜,翟振丽,马维红.结肠癌术后辅助化疗对血Caspase-3、Survivin、CD44v6表达的影响[J].广西医学,2014,17(12):1766-1768.

[3] 安慧敏.OPN和CD44V6在结直肠癌和结直肠腺瘤中的表达及意义[J].浙江创伤外科,2014,6(1):26-28.

[4] 孟迪,冯晓燕,进淑娟,等.CD44v6、MUC1及VEGF在三阴性乳腺癌组织中的表达及其临床意义[J].肿瘤学杂志,2014,9(2):91-96.

[5] 管小倩,颜丽萍,田小林,等.术中植入氟尿嘧啶植入剂对结直肠癌患者外周血Survivin、CD44V6的影响[J].安徽医科大学学报,2014,7(1):85-88.

[6] 熊正文,张华东,寻凤华,李宏伟.Snail与CD44v6 mRNA在宫颈病变中的表达及临床意义[J].中华全科医学，2012，10(3)：378-380，499.

[7] 邰贺,王丹,梁艳,等.复合维生素、维生素E对高同型半胱氨酸血症小鼠抗氧化酶活性及GATA-3的影响[J].武警医学,2014,25(1):56-58.

[8] Zang YS, Fang Z, Liu YA, et al. Repressor of gata-3 can negatively regulate the expression of t cell cytokines through modulation on inducible costimulator[J]. Chin Med J (Engl), 2012,125(12):2188-2194.

[9] Nandi S, Ioshikhes I. Optimizing the gata-3 position weight matrix to improve the identification of novel binding sites[J]. BMC Genomics, 2012,13416.

[10] He XJ, Liu WG, She SY, et al. Expression of insulin-like growthfactor Ⅱ mRNA-binding protein 3 in transitional cell carcinoma of the bladder and its clinical significance[J]. Clin Med China, 2011, 27(1):82-85.

[11] 陈芳，李丽.乙酰肝素酶、MMP-9在膀胱移行细胞癌侵袭转移中的表达相关性及临床意义[J].中国医药导报，2012,9(1):22-24.

(收稿日期：2015-12-27)

中图分类号：R737.14

文献标志码：B

文章编号：1002-266X(2016)09-0075-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.09.030