田永峰等

摘要利用阳离子交换固相萃取柱（Waters Oasis MCX）富集净化DNA样品，建立了液相色谱串联质谱（LCMS/MS）同时检测DNA中3甲基腺嘌呤（N3MeA）和3乙基腺嘌呤（N3EtA）的方法。采用氘代3甲基腺嘌呤（d3N3MeA）和氘代3乙基腺嘌呤（d5N3EtA）为内标； 进样量3 μL，分析时间为13 min；亲水相互作用色谱柱（Waters XBridge HILIC）进行液相分离，流动相为10 mmol/L甲酸铵乙腈溶液（5∶95， V/V， pH=4.0），流速250 μL/min；质谱条件：电喷雾离子源，多反应监测正离子扫描方式；电喷雾电压：5500 V， 雾化气： 369 Pa， 气帘气：185 Pa， 电离温度： 400 ℃，驻留时间： 40 ms。本方法对N3MeA和N3EtA的检出限分别为0.043和0.007 μg/L，方法回收率为87.8%～103.0%。采用本方法检测了卷烟烟气粒相物暴露的DNA中N3MeA和N3EtA含量。结果表明，卷烟烟气粒相物暴露后的小牛胸腺DNA中3甲基腺嘌呤和3乙基腺嘌呤可被本方法定量检出。1引言

卷烟烟气中包含超过5000种化学物质＼[1，2＼]，其中包含致突变并可导致DNA发生烷基化损伤的物质＼[3＼]。这些物质可与DNA反应形成烷化类的DNA加合物，已经成为多学科的研究热点＼[4～7＼]。烟气中致癌性的烷化试剂与DNA反应的主要位点是鸟嘌呤的N7位和腺嘌呤的N3位，DNA反应后形成7烷化鸟嘌呤和3烷化腺嘌呤＼[8，9＼]。3烷化腺嘌呤中比较重要的是3甲基腺嘌呤（N3methyladenine，N3MeA）＼[10＼]、和3乙基腺嘌呤（N3ethyladenine，N3EtA）＼[8＼]，其结构式见图1。3甲基腺嘌呤在3烷化腺嘌呤中突变性最强，并且具有基因毒性，3乙基腺嘌呤虽然不具有基因毒性，但是在经体内烷基糖基酶的修复后会在DNA中产生脱嘌呤的位点，这些位点被认为是引起基因突变并导致癌症的主要因素＼[11～16＼]。因此，DNA中的3甲基腺嘌呤，3乙基腺嘌呤被认为是卷烟烟气接触后DNA发生烷基化损伤的标志物＼[17，18＼]。准确测定DNA中3甲基腺嘌呤和3乙基腺嘌呤，可用于评估DNA受到的破坏程度及可能的致癌风险＼[19＼]。……