绒山羊液态精液稀释技术

刘兴伟，陈宁

(辽宁省畜牧科学研究院，辽宁 辽阳 111000)

液态精液是指以液体形态存在未经冷冻的精液[1]。绒山羊液态精液稀释技术是绒山羊人工授精技术中重要的环节，主要包括稀释液的选择和配制，稀释操作注意事项、稀释比例的确定等内容。

1精液稀释液的选择和配制

精液稀释液是精子直接接触的外部环境，稀释液的成份组成直接影响精子的结构完整、活力、存活时间及输精受胎效果。按稀释液的成份和特点，液态精液稀释液可以分为简单稀释液和复杂稀释液。简单稀释液如0.9%的生理盐水、5%的葡萄糖溶液、2.9%的柠檬酸钠溶液等，成份比较单一。

这类稀释液只给精子提供一个等渗的外部环境，在稀释精液时起到扩充精液体积，便于输精的作用，并不能给精子提供抗低温和保护精子细胞膜的作用，稀释倍数高时还会对精子造成不利应激。因此，简单稀释液用于精液稀释时一般稀释比例不超过1∶2，精液稀释后立即输精。复杂稀释液成份比简单稀释液多，往往在3种以上，主要添加单双糖类，酸、碱、盐、细胞膜保护剂、抗菌素等，具有等渗、抗缓冲、抗低温、抑菌等多重作用，在用于精液稀释时，可以进行比例较高的稀释，但通常稀释不超过50倍[2]。

表1为几种常用的液态精液稀释液常用配方及使用说明

配方代号配 方使用说明10.9%生理盐水稀释倍数为2倍以内,稀释后立即输精。25%葡萄糖溶液稀释倍数为2倍以内,稀释后立即输精。32.9%柠檬酸钠溶液稀释倍数为2倍以内,稀释后立即输精。4葡萄糖3g,柠檬酸钠1.4g,加蒸馏水至100mL。将上述液煮沸后冷却至37℃,再取上述液80mL,加卵黄20mL,青霉素1×105IU,搅拌均匀。根据原精质量、配种数量及输精要求确定稀释倍数,稀释倍数控制在50倍以内为宜;稀释后在0℃~5℃条件下保存,48h内使用。5乳糖5.5g,葡萄糖3g,柠檬酸钠1.4g,三基0.12g,加蒸馏水至100mL。将上述液煮沸后冷却至37℃,再取其液80mL,加卵黄20mL,青霉素1×105IU,链霉素1×105IU,搅拌均匀。根据原精质量、配种数量及输精要求确定稀释倍数,稀释倍数控制在50倍以内为宜;稀释后在0℃~5℃条件下保存,48h内使用。

2液态精液稀释比例的确定

液态精液的稀释比例是指1个单位体积的原精与添加稀释液的体积之比。态精液稀释时采用多大比例，取决于原精的精子密度、活力、每次输精时规定的有效精子数量、输精时输入的每份精液的体积等因素。

2.1添加稀释液体积公式推算

共分如下4个步骤。

第2步：根据原精量、原精密度、稀释后的精子活力计算出稀释后精液的有效精子总数量，即K1=原精量×原精密度×稀释后精子活力=e×p×l

2.2精液稀释比例公式推算

精液稀释比例表述为原精体积与稀释液体积之比，

2.3稀释比例计算

2.3.1公式中数值的确定

当采集精液并稀释后，原精精子密度p、稀释后的精子活力l为固定数值，pl数值表示的是单位体积的有效精子数，pl数值越大，稀释比例越大，反之越小。每次输入稀释后的精液体积V0越大，则稀释倍数越高，反之越低；每次输精输入的有效精子数量k越大，则稀释倍数越低，反之则越高。因此，只要在上式中代入pl最大值、V0最大值、k最小值，就可求得精液稀释的最大比例。

原精精子密度p、稀释后的精子活力l存在如下关系：原精密度增大，死精子增多，活力下降，当原精密度达到3.49×109时，原精活力降至60%，活力达到标准规定的下限值。单位体积的有效精子数pl=(3.49×109)×60%=2.094×109，正常情况下pl数值为(2.5×109)×60%～(1.5×109)×70%即1.5×109～1.75×109。因此，数pl=2.094×109可以视为最大值。在本标准7.5款中规定“每次输精量0.25～0.5mL，有效精子数不低于2×107个”，可见，V0最大值为0.5mL，k最小值为2×107个(为计算方便，简写为0.2亿，下同)。

2.3.2将上述数值代入稀释比例公式

据此，表1的配方4和配方5使用说明中规定“稀释倍数控制在50倍以内为宜”。

上述公式中：

e-原精精液量，单位为mL；

V-稀释后的精液总体积，单位为mL；

V1-加入的稀释液体积，单位为mL；

p-原精精子密度，单位为1×108/mL；

V0-每次输入稀释后的精液体积，单位为mL，为设定值；

K0-出稀释后单位体积的有效精子数，单位为1×108/mL；

K1-原精稀释后总有效精子数，单位为1×108/mL；

k-每次输精输入的有效精子数量，单位为1×108，为设定值；

l-稀释后的精子活力，单位为%；

X-精液稀释比例。

3精液稀释时注意事项[3]

3.1应使用专用稀释液产品或自制稀释液。

稀释精液在精液处置室进行，室内温度控制在25 ℃～30 ℃。

3.2精液采集后20 min内用稀释液等温稀释。

3.3稀释过程中避免振荡、阳光直射、接触水及其它化学物质。

3.4在稀释时，将稀释液加入精液中，而不是将精液加入稀释液中。

3.5在做较大倍数的稀释时，先将精液做低倍稀释，然后在此基础上再进行稀释。

3.6精液稀释时，要将稀释液沿溶器内壁缓缓注入精液中，注入精液后缓慢搅动，使之混合均匀。

4参考文献

[1]李长彬.牛液态精液处理的方法[J].养殖技术顾问，2013年(5)：50.

[2]张世伟，宋先忱，朱延旭，等.绒山羊饲养300问[M].长春：吉林大学出版社，2005：91.

[3]权凯，等.牛羊人工授精技术图解[M].北京：金盾出版社，2010：51.

作者简介：刘兴伟(1965-)，男，高级畜牧师。

收稿日期：2015-10-14

中图分类号：S826.3

文献标识码：B

文章编号：1005-2739(2016)02-0029-03