李亚玲 张伟 梁惠宇 周陆陆 姚永明 唐胜建

[摘要]目的：研究外源性microRNA-130a在卵巢颗粒细胞KGN中过表达对FOXL2基因表达的影响，探索microRNA-130a对KGN细胞增殖的影响。方法：人工设计合成靶向FOXL2基因的microRNA-130a模拟物，脂质体法将microRNA-130a模拟物转染入KGN细胞中，Trizol法和RIPA蛋白裂解法分别获取高纯度的细胞总RNA和总蛋白，实时荧光定量聚合酶联反应（FQ-PCR）检测microRNA模拟物转染后细胞中FOXL2基因mRNA表达水平，Western Blot检测FOXL2蛋白表达水平，四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测microRNA-130a转染后KGN细胞的增殖情况。 结果：成功转染KGN细胞后，阴性对照组FOXL2基因mRNA和蛋白的表达水平与空白对照组相比无明显的差异（P>0.05），miR-130a转染组能显著抑制FOXL2 mRNA和蛋白的表达，与空白对照组和阴性对照组相比均有统计学差异（p<0.05）。MTT法检测各组KGN细胞的OD值及细胞增值率，microRNA-10a转染后能明显促进KGN细胞的增殖，与与空白对照组和阴性对照组相比均有统计学差异（P<0.05）。结论：外源性的miR-130a对FOXL2基因mRNA和蛋白表达有明显的抑制作用，且能明显促进KGN细胞的增殖。

[关键词] miR-130a；转染；KGN细胞：FOXL2；基因表达调控；细胞增殖

[中图分类号]Q813.1

[文献标志码]A [文章编号]1008-6455（2016）01-0030-04

FOXL2是叉头框转录因子家族成员之一，主要表达在眼周、卵巢和垂体细胞中，该基因最早由Crisponi作为小睑裂综合征（BPES，Blepharophimosis Syndrome，MIM： 110100）及卵巢早衰（premature ovarian failure，POF）的候选基因被克隆定位Ⅲ。小睑裂综合征是一种常染色体显性遗传病，临床上以睑裂狭小，上睑下垂，反向性内眦赘皮和内眦远距为主要征象，BPES根据是否存在卵巢早衰分为两型，I型合并有卵巢早衰（premature ovarianfailure，POF），II型只表现为眼睑畸形，超过2/3的BPES患者携带有FOXL2的基因内突变，此外FOXL2的杂合突变还能导致卵巢功能早衰和女性不孕。FOXL2作为转录因子功能的发挥需要FOXL2基因本身的磷酸化激活，发生FOXL2基因突变的体细胞FOXL2功能失活，研究证实FOXL2基因突变能够促进细胞的增殖，以及抑制细胞的凋亡。