高效液相色谱-串联质谱法检测豆芽中的6-苄基腺嘌呤含量

6-苄基腺嘌呤（6-benzylaminopurine，6-BA）是一种人工合成的细胞分裂素，与植物内源性激素具有相似的结构及性质，为一种植物生长调节剂[1]。如果人体摄入过量会刺激皮肤黏膜，出现食道和胃黏膜损伤、恶心、呕吐等症状。目前，测定豆芽中6-BA的方法主要有高效液相色谱法、液相色谱-大气压化学源质谱法及液相色谱—串联质谱法[2-4]等。本研究采用LC-MS/MS法来测定豆芽中的6-BA，提取试剂为酸化甲醇，以乙腈及水（含0.1%甲酸）为流动相进行梯度洗脱，经过反相色谱分离后以多反应监测方式进行检测。

材料和方法

仪器 API 4000型三重四极杆串联质谱仪，LC-20A液相色谱仪（包括二元输液泵及自动进样器)。药品及试剂 6-BA标准品（含量97.0%）,甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

标准储备溶液 精密称取6-BA 0.1000g于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，作为标准储备溶液。此标准储备溶液每毫升相当于1.0mg 6-BA。

色谱柱：Symmetry C18柱，3.5m，150×2.1mm I.D.，waters公司；流动相：乙腈-水（含0.1%甲酸）；流速：0.25 mL/min；柱温：25℃；进样量：10μL。梯度洗脱条件见表1。

时间（min） 水相 有机相9.5 90% 10% 12 90% 10%

质谱条件 采用电喷雾离子化源；离子喷射电压：5500V；温度：500℃；源内气体1（GS1，N2）压力：55psi；气体2（GS2，N2）压力：55psi；气帘气体（N2）压力：15psi；正离子方式检测；6-BA的解簇电压（DP）为70V，碰撞能量（CE）为80eV；用于定量分析的离子反 应 为m/z 226.2→m/z 64.9，6-BA结 构 及[M+H]+的产物离子扫描质谱图见图1。

图1 6-BA的结构及[M+H]+的产物离子扫描质谱图

豆芽样品的预处理 称取豆芽样品500g用食物粉碎机粉碎后，取5g样品（精确至0.01g）于50mL聚丙烯离心管中，加入10mL酸化甲醇（每100mL甲醇中加入乙酸100μL，混匀），用均质机匀质3min，超声提取3min，1,2000rpm离心10min，上清液转入25mL容量瓶中，样品再用10mL酸化甲醇重复提取一次。……