麦文慧，陈海，朱雄，吴清艳，王日，陈柳红，陈学，郑霄，李伟

(1.海口市第三人民医院检验科，海南 海口 571100；2.三亚市人民医院，海南 三亚 572000；3.传染病预防控制国家重点实验室 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，北京 102206)

·调查研究·

威马逊台风经过地区集中出现的五例类鼻疽流行病学分析

麦文慧1，陈海2，朱雄2，吴清艳1，王日1，陈柳红1，陈学1，郑霄3，李伟3

(1.海口市第三人民医院检验科，海南 海口 571100；2.三亚市人民医院，海南 三亚 572000；3.传染病预防控制国家重点实验室 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，北京 102206)

目的 分析威马逊台风过后集中发生的5例类鼻疽，探讨台风对类鼻疽发病的影响。方法2014年8月海南省遭遇18级超强台风“威马逊”，台风过后发病来海口市第三人民医院就诊并确诊的类鼻疽5例，对患者的基本情况、临床特点、流行病学进行分析。对培养分离的菌株进行16SrDNA同源性测序比对、MLST多位点序列分型、TTSS1与BLF1毒力因子检测等分子生物学分析。4个月后家访了解患者预后情况，并采集患者居住地泥土和水培养做环境调查。结果威马逊台风是导致本次5例类鼻疽发病的重要因素。5例患者均来自台风中心经过海南东北部沿海一带，均在台风过后一个月内发病。5例均以肺部感染、脓毒血症为主要表现，死亡3例。5株分离菌株16SrDNA同源性比对均为类鼻疽伯克霍尔德菌，MLST分型分别为不同的ST型，毒力因子检测均为阳性。环境样本培养没有检出类鼻疽伯克霍尔德菌。结论威马逊台风是导致本次5例类鼻疽发病的重要因素，台风会加大类鼻疽水源性或吸入性感染的概率，导致散发、甚至爆发流行。

类鼻疽；类鼻疽伯克霍尔德菌；台风；威马逊

类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei，BP)是热带亚热带地区的水和土壤中的腐生菌，由其引起的类鼻疽病是一种流行于热带亚热带地区的环境性人畜共患传染病[1]。人们常常因为破损的皮肤黏膜接触到含有BP的水和泥土或吸入含有BP的尘土或气溶胶而感染。经常与土地和水打交道的农民、海上作业者成了BP感染的主要对象，另外年老体弱者、有糖尿病等免疫功能低下者也容易被BP感染上。类鼻疽病一般散发，可一旦感染，死亡率很高。台风和水患易导致该菌流行[2]。台风卷起的尘埃及由其带来的洪涝，加剧了水源污染和气溶胶形成，这可能是导致本次突然增加的5例患者感染的重要原因。现就其流行病学特征和临床特点分析如下：

1 材料与方法

1.1 一般资料 查阅2014年18级特大台风“威马逊”过后一个月内，从台风经过地区发病来我院住院的5例类鼻疽患者，对患者的基本情况、临床特点、流行病学特征等进行描述和分析。

1.2 病原学检测

1.2.1 试剂与仪器 美华全自动血培养仪；美华微生物鉴定药敏分析仪；迪景血/中国蓝分隔平板、巧克力平板；德国Qiagen公司生产的DNA提取试剂盒；宝生物工程大连有限公司生产的Tap酶；美国BAKER牌Ⅱ级生物安全柜；北京擎科新业生物技术有限公司进行DNA测序；用DNASTAR6.0及Oligo6.0软件进行序列分析及引物设计。

1.2.2 细菌培养 抽取患者全血打入血培养瓶中置于全自动血培养仪中增菌培养。取阳性培养液接种血/中国蓝分隔平板、巧克力平板，置37℃温箱培养24 h，挑取可疑菌落接种于美华非发酵菌鉴定药敏试剂板，37℃温箱培养24 h用美华全自动鉴定药敏分析仪读取药敏结果，继续培养48 h读取鉴定结果。

1.2.3 16SrDNA序列分析 提取菌株DNA，进行PCR扩增及测序。测序结果由NCBI网站(http:// www.ncbi.nlm.nih.gov/)的BLAST功能进行序列比对及同源搜索。

1.2.4 MLST多位点序列分型 提取菌株DNA，PCR扩增等位基因ace、gltB、gmhD、lepA、lipA、narK、ndh并测序，把测序结果输入类鼻疽伯克霍尔德菌MLST数据库(http://bpseudomallei.mlst.net)中，即可查获各等位基因序列号和菌株序列型(Seqrence Type，ST)[3]。

1.2.5 毒力因子检测 PCR检测分离菌株中5株分离菌的三型分泌系统(typeⅢ secretion system，TTSS1)和类鼻疽伯克霍尔德菌致死因子(Burkholderia Lethal Factor 1，BLF1)两种毒力因子的携带情况，以类鼻疽伯克霍尔德菌BP003为阳性对照[4-5]。

1.2.6 环境样品采集与分离培养 按照环境类鼻疽伯克霍尔德菌采样原则及分离方法[6]，于2015年 2月到5例患者家附近采集泥土、污水、水井水等样品60份，送实验室进行菌株分离培养，每天观察生长情况，挑取湿润、淡粉色有金属光泽、边缘皱褶的疑似菌落做进一步鉴定。

2 结果

2.1 病例查阅结果 5例患者均为当地居民，居住地均在威马逊台风登陆途经的文昌、海口一带。平时生活较规律，近期无出游史。威马逊台风经过时有正面吹风、淋雨、受凉、淹溺、喝脏水等受灾史。5例患者均为男性，年龄47～81岁，平均63.6岁，农民3例，司机1例，职员1例。基础病方面2例有糖尿病，另外3例为低蛋白血症和淋巴细胞低下的免疫功能受损者。发病时间最快者为台风过后2 d，最慢者为台风后18 d，潜伏期平均为8 d。5例患者均以发热、畏寒，咳嗽、咳少许白黏痰为首发症状，有2例还伴有头痛和腹痛。临床表现没有特异性，首诊均误诊。病情进展急进，短期内即发展为肺部感染和脓毒血症，还有1例并发肝脓肿，1例并发腮腺脓肿。5例均以血培养出类鼻疽伯克霍尔德菌得以确诊，应用美罗培南、多西环素、哌拉西林/他唑巴坦等敏感药物治疗病情均有好转，然而患者稍有好转即因个人原因要求出院，住院时间3～10 d。家访得知出院后3例死亡，1例复发，只有1例治愈。

2.2 病原学检测结果

2.2.1 菌株培养 5株细菌培养24 h可见银白色湿润菌落，72 h后菌落变干呈车轮状，有浓烈的泥土气味，涂片为革兰氏阴性中间淡染短杆菌(菌落及细菌形态见图1～图3)。氧化酶阳性。经美华鉴定药敏分析系统鉴定结果均为类鼻疽伯克霍尔德菌(99%)。环境样品采样未培养出类鼻疽伯克霍尔德菌。

2.2.2 序列测序 测序结果经BLAST搜索比对，5株分离菌株的16SrDNA序列与类鼻疽伯克霍尔德菌(k96243)具有高度同源性。5株类鼻疽伯克霍尔德菌经MLST测序分型结果分别为不同的ST型，毒力因子检测均为阳性，见表1。

图1 类鼻疽伯克霍尔德菌在血/中国蓝平板上24 h菌落

图2 类鼻疽伯克霍尔德菌在血/中国蓝平板上4 d菌落

图3 类鼻疽伯克霍尔德菌革兰氏染色(100×10)

表1 5株类鼻疽伯克霍尔德菌的MLST型别、相关毒力因子携带情况

3 讨 论

类鼻疽病一般散发，全年均可发生。其流行受气候影响，多发于雨季，国内外已有多篇文献报道类鼻疽的流行与台风和雨水有密切关系。例如符惠群等[7]调查海南省1997-2007年的类鼻疽病例发现降雨丰富的年份患病率会比其他年份多且发病时间90.9%在多雨秋季，而这恰是该地区台风盛行的季节；吴华等[8]最新报道海南有42%的类鼻疽患者是在台风和降雨较集中的8～10月发病；印度学者也报道印度68%的类鼻疽是在降雨量较多的季风季节(6～9月)发病，且感染人数与降雨量呈正比[9]。另外恶劣气候如暴雨、台风、海啸也常导致类鼻疽爆发流行，例如台湾二仁河流域在2005年经历一场台风及由台风带来的洪水后类鼻疽爆发流行[10]；2007年7～8月，湛江地区因台风及雨水超历史记录，类鼻疽呈爆发式感染[2]。笔者所在医院往年一年最多收治1～2例类鼻疽，为散发，本次“威马逊”台风过后一个月内突然增加5例，且地点都集中在台风登陆途经的文昌海口一带，病例的时空聚集性明显，笔者认为台风是导致本次突然增加的5例患者感染的重要原因。

海南地处西太平洋，每年都会有台风灾害发生，台风常常会带来大量降雨造成洪灾，还可能会引起类鼻疽爆发流行。虽然BP是热带地区水和土壤里的腐生菌，但它的地理分布是不均匀的，因此有学者就提出了BP的传播需要通过载体如洪水或风的发生[10]。台湾学者Chen等[11]研究证实台风过后空气中BP阳性率高达80%～100%，台风经过时卷起的尘土加剧了感染性气溶胶的形成，可能是爆发流行的重要原因。本次5例患者居住地环境样品采样均未检出BP，加上临床分离菌株呈现不同的ST型，推测BP感染性生物体可能是随台风和洪水从别处播散而来。具体的感染机制，有待进一步探讨。

总之，台风会增加类鼻疽水源性或吸入性感染的概率，导致散发、甚至爆发流行。疫区相关部门在做好防风工作的同时，还应警觉这个不可预料的急性热带传染病，加大力度宣传类鼻疽知识，定期开展医护人员培训，使人们深入了解类鼻疽，做好诊疗和预防。

[1]李俐,陆振豸,韩藕儿,等.我国类鼻疽流行病学调查[J].中华流行病学杂志,1994,15(5):292-295.

[2]黄云平,聂晓辉,黄妙儿,等.湛江地区类鼻疽伯克霍尔德菌特征与流行病学研究[J].中国感染控制杂志,2008,7(4):268-271.

[3]Godoy D,Randle G,Simpson AJ,et al.Multilocus sequence typing and evolutionary relationships among the causative agents of melioidosis and glanders,Burkderia pseudomallei and Burkholderia mallei [J].J Clin Microbiol,2003,41(5):2068-2079

[4]Novak RT,Glass MB,GeeJE,et al.Development and evaluation of a real-time PCR assay targeting the typeⅢsecretion system of Burkholderia pseudomallei[J].J Clin Microbiol,2006,44(1):85-90.

[5]Cruz-Migoni A,Hautbergue GM,Artymiuk PJ,et al.A Burkholderia pseudomallei toxnhibits helicase activity of translation factor eIF4A [J].Science,2011,334(6057):821-824.

[6]Limmathurotsakul D,Dance DA,Wuthiekanun V,et al.Systematic review and consensus guidelines for environmental sampling of Burkholderia pseudomallei[J].PLoS Negl Trop Dis,2013,7(3): e2105.

[7]符惠群,郭红荔,莫成锦,等.海南地区类鼻疽伯克霍尔德菌的流行病学调查及临床特征研究[J].山东医药,2009,49(12):72-74.

[8]吴华,王旭明,黄东良,等.海南类鼻疽的流行病学特点和临床特点调查研究[J].中国全科医学,2013,16(8):923-926.

[9]Saravu K,Mukhopadhyay C,Vishwanath S,et al.Meliodosis in southern India:epidemiological and clinical profile[J].Southeast Asian J Trop Med Public Health,2010,41(2):401-409.

[10]Su HP,Yang HW,Chen YL,et al.Prevalence of melioidosis in the Er-Ren River Basin,Taiwan:implications for transmission[J].J Clin Microbiol,2007,45(8):2599-2603.

[11]Chen YL,Yen YC,Yang CY,et al.The concentrations of ambient Burkholderia pseudomallei during typhoon season in endemic area of melioidosis in Taiwan[J].PLoS Negl Trop Dis,2014,8(5):e2877.

Epidemiological analysis of 5 cases of malleoidosis in affected areas of typhoon Rammasun.

MAI Wen-hui1,CHEN Hai2,ZHU Xiong2,WU Qing-yan1,WANG Ri1,CHEN Liu-hong1,CHEN Xue1,ZHENG Xiao3,Li Wei3.1.Department of Clinical Laboratory,the Third People's Hospital of Haikou,Haikou 571100,Hainan,CHINA;2.People's Hospital of Sanya, Sanya 572000,Hainan,CHINA;3.State Key Laboratory for Infectious Disease Prevention and Control,National Institute for Communicable Disease Control and Prevention,Chinese Center for Disease Control and Prevention,Beijing 102206,CHINA

Objective To analyze 5 cases of malleoidosis in affected areas of typhoon Rammasun,and to investigate the effects of typhoon on the incidence of malleoidosis.MethodsFive patients with malleoidosis were diagnosed in the Third People's Hospital of Haikou after super typhoon Rammasun in August 2014.The basic situation,clinical characteristics and epidemiology of the patients were analyzed.The isolated strains were analyzed by 16SrDNA homology comparison,multilocus sequence typing(MLST),TTSS1 and BLF1 virulence factor detection.After 4 months, the patients were visited for prognosis,and soil and water samples in their residence were collected for environmental investigation.ResultsTyphoon Rammasun was an important factor in the pathogenesis of 5 cases of malleoidosis.Five patients were from northeastern coast areas of Hainan which were slammed by typhoon center,and the disease in all the patients occurred within one month after the typhoon.The main manifestations of the five patients were pulmonary infection and pyemia(3 cases of death).16SrDNA homology comparison showed the five strains and Burkholderia pseudomallei were highly homologous,of which the MLST types were different ST types and virulence factor test was positive. Burkholderia pseudomallei were not detected in the collected soil and water samples.ConclusionTyphoon Rammasun is an important factor in the pathogenesis of the 5 cases of malleoidosis.The typhoon will increase the chance of malleoidosis infection through water or inhalation,resulting in sporadic and even large-scale outbreak of the disease.

Malleoidosis;Burkholderia pseudomallei;Typhoon;Rammasun

R517.2

D

1003—6350（2016）10—1695—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.10.052

2016-02-18)

海南省自然科学基金(编号：814389)；海南省重点科技计划项目(编号：ZDXM2014143)

麦文慧。E-mail：mai_wenhui@126.com