杨雯，张晓伟，胡睿，胡建功(泰山医学院附属医院，山东泰安271000)

Gli-1、ZEB2蛋白在结肠癌组织中的表达变化及意义

杨雯，张晓伟，胡睿，胡建功(泰山医学院附属医院，山东泰安271000)

目的 探讨Gli-1、E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)蛋白在结肠癌发生、发展中的作用。方法选择结肠癌组织标本(结肠癌组)和相应癌旁正常结肠组织标本(癌旁组)各38例份，同期正常结肠组织10例份(正常对照组)。采用免疫组化SP法检测各组Gli-1、ZEB2蛋白表达，分析其与结肠癌患者临床病理参数的关系，分析结肠癌组织Gli-1、ZEB2蛋白表达的相关性。结果结肠癌组Gli-1蛋白阳性表达23例份(60.5%)，癌旁组为5例份(13.2%)，正常对照组为1例份(10.0%)；结肠癌组ZEB2蛋白阳性表达21例份(55.3%)，癌旁组为13例份(34.2%)，正常对照组为2例份(20.0%)；结肠癌组Gli-1、ZEB2蛋白阳性表达率均高于癌旁组和正常对照组(P均<0.05)，癌旁组和正常对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结肠癌组织Gli-1、ZEB2蛋白阳性表达与患者的TNM分期、淋巴结转移均有关(P均<0.05)，与性别、年龄、肿瘤直径、分化程度均无关(P均>0.05)。结肠癌组织Gli-1与ZEB2蛋白表达呈正相关(r=0.723，P<0.01)。结论结肠癌组织Gli-1、ZEB2蛋白表达升高，其异常表达可能与结肠癌的发生、发展有关。

结肠癌；HH信号通路；Gli-1；E盒结合锌指蛋白2

结肠癌是临床常见的消化道恶性肿瘤之一，其发病率在我国居全部恶性肿瘤的第4位。结肠癌的发病机制目前尚未明确，其发病可能与生活方式、遗传、腺瘤、炎症等有关。最新研究发现，恶性肿瘤的发生涉及一系列原癌基因的异常激活以及抑癌基因突变等，从而引起信号通路发生传导异常[1]。HH信号通路参与正常胚胎发育及组织修复等过程，其异常激活在多种人类恶性肿瘤中普遍存在。Gli-1是HH信号通路的下游转录因子，激活后可启动细胞核内目的基因的表达[2]。而E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)可以通过与靶基因启动子区E-box结合，参与上皮间质转化。本研究探讨Gli-1和ZEB2蛋白在结肠癌发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2014年3～10月泰山医学院附属医院手术切除的结肠癌组织标本(结肠癌组)和相应癌旁正常结肠组织标本(癌旁组)各38例份，术后组织病理检查明确诊断。患者男24例，女14例；年龄43～73岁、中位年龄58岁，≥58岁28例、<58岁10例；肿瘤直径≤3 cm 20例，>3 cm 18例；TNM分期[2]：Ⅰ、Ⅱ期15例，Ⅲ、Ⅳ期23例；分化程度：高分化10例，中分化19，低分化9例；组织学类型均为腺癌；淋巴结转移22例，无转移16例。术前未进行放化疗以及其他免疫治疗，无其他部位肿瘤发生。选择同期结肠镜下活检得到的正常结肠组织10例份作为正常对照组。

1.2 结肠组织Gli-1、ZEB2蛋白表达检测 采用免疫组化SP法。取三组组织标本，均经10%甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚度切片。常规进行HE染色和免疫组化染色，方法如下：切片脱蜡及水化，高压修复，依次加入兔抗人Gli-1多克隆抗体(1∶100)和鼠抗人ZEB2单克隆抗体(1∶50)、Ⅰ抗、Ⅱ抗以及新鲜配置的DAB显色。自来水冲洗，苏木精复染，盐酸乙醇分化，自来水冲洗。碳酸锂返蓝，经梯度乙醇脱水干燥后二甲苯透明，中性树胶封固。由两名病理科医生于显微镜下观察细胞染色情况，计算阳性细胞比例。Gli-1蛋白主要定位于细胞核和细胞质，ZEB2蛋白主要定位于细胞质，以出现淡黄或棕黄色颗粒视为阳性染色。阳性细胞比例<5%定义为阴性表达，≥5%定义为阳性表达。

1.3 结肠癌组织Gli-1、ZEB2蛋白表达与患者临床病理参数的关系 分析结肠癌组织Gli-1、ZEB2蛋白表达患者性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、TNM分期和淋巴结转移的关系。分析结肠癌组织Gli-1、ZEB2蛋白表达的相关性。

1.4 统计学方法 采用SPSS18.0统计软件。计数资料以率表示，结果比较采用χ2检验；组织Gli-1、ZEB2蛋白表达的关系采用Spearman相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组Gli-1、ZEB2蛋白表达比较 结肠癌组Gli-1蛋白阳性表达23例份(60.5%)，癌旁组为5例份(13.2%)，正常对照组为1例份(10.0%)；结肠癌组ZEB2蛋白阳性表达21例份(55.3%)，癌旁组为13例份(34.2%)，正常对照组为2例份(20.0%)；结肠癌组Gli-1、ZEB2蛋白阳性表达率均高于癌旁组和正常对照组(P均<0.05)，癌旁组和正常对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。

2.2 结肠癌组织Gli-1、ZEB2蛋白阳性表达与患者临床病理参数的关系 结肠癌组织Gli-1、ZEB2蛋白阳性表达与患者的TNM分期、淋巴结转移均有关(P均<0.05)，与性别、年龄、肿瘤直径、分化程度均无关(P均>0.05)。见表1。

表1 结肠癌组织Gli-1、ZEB2蛋白阳性表达与患者临床病理参数的关系

2.3 结肠癌组织Gli-1与ZEB2蛋白表达的关系 Spearman相关分析结果显示，结肠癌组织Gli-1与ZEB2蛋白表达呈正相关(r=0.789，P<0.01)。

3 讨论

HH信号通路由HH蛋白、Ptch跨膜蛋白、Gli家族等下游转录因子组成，其在多种肿瘤组织中被激活[3]。Gli是HH信号通路转导的重要组成部分，包括Gli-1、Gli-2、Gli-3，均含有高度保守的DNA结合区。Gli-1处于HH信号通路的最末端，直接调控目的基因的表达，与多种肿瘤的发生、发展密切相关[4]。Cavicchiol等[5]对62例份胃癌组织中的Gli-1蛋白进行检测，发现Gli-1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率明显高于正常胃黏膜组织。郭杰芳等[6]研究发现，胰腺癌患者癌组织、癌旁组织、正常癌旁组织的Gli-l阳性表达率分别为68%、24%、0，推测Gli-l检测有助于判断胰腺癌患者的分化程度、远处转移情况等。王俊菊等[7]研究显示，口腔鳞状细胞癌与正常口腔黏膜组织Gli-1蛋白阳性表达率分别为65.0%和0。Kou等[8]研究结果提示，Gli-1蛋白表达与肿瘤的侵袭能力具有相关性。périgny等[9]研究提示，皮肤基底细胞癌Gli-1蛋白阳性表达率达90%以上。本研究结果显示，结肠癌组Gli-1蛋白阳性表达率均高于癌旁组和正常对照组，癌旁组和正常对照组比较差异均无统计学意义，说明结肠癌组织中Gli-1蛋白表达升高；结肠癌组织Gli-1蛋白表达与患者的TNM分期和淋巴结转移有关，与性别、年龄、肿瘤直径、分化程度无关，说明结肠癌组织中Gli-1蛋白表达升高可能与其发生、发展有关。

上皮间质转化(EMT)是指上皮细胞失去上皮特征的同时获得间质细胞表型和转移能力的一种生物学现象。在肿瘤转移的过程中，癌细胞通过EMT实现对周围组织的浸润；而在种植部位，癌细胞通过间质细胞-上皮细胞转化(MET)最终形成与原发灶在形态结构上相似的转移灶[10]。ZEB家族是诱导MET的因素之一，ZEB2高表达可以促进间质性标志物如基质金属蛋白酶(MMP)家族的表达，诱导EMT的发生，从而促进肿瘤细胞的侵袭和转移。ZEB家族还可与其他参与EMT发生的调节因素相互联系，形成一个作用于EMT的调控网络[11]。周文娟等[12]发现，宫颈癌组织ZEB2蛋白阳性表达率明显高于正常宫颈黏膜组织，ZEB2蛋白高表达与宫颈癌的分化程度、FIGO分期及淋巴结转移有关，且可作为宫颈癌预后的独立预测因素，与Mejlvang等[13]观点一致。Oztas等[14]研究提示，ZEB2蛋白在肺癌组织中的阳性表达率可达70%，正常肺组织中则未见表达。本研究结果显示，结肠癌组ZEB2蛋白阳性表达率均高于癌旁组和正常对照组，癌旁组和正常对照组比较差异均无统计学意义，说明结肠癌组织中ZEB2蛋白表达升高；结肠癌组织ZEB2蛋白表达与患者的TNM分期和淋巴结转移有关，与性别、年龄、肿瘤直径、分化程度均无关，说明结肠癌组织中ZEB2蛋白表达升高可能与其发生、发展有关。分析原因，可能是ZEB2蛋白在抑制E-cadherin表达的同时激活了MMP1、MMP2、MMP14等，诱导EMT发生，从而促进了肿瘤细胞的迁移与侵袭[15]。本研究结果显示，结肠癌组织Gli-1、ZEB2蛋白表达呈正相关，提示ZEB2可能是Gli-1的下游因子，仍需进行深入研究。

综上所述，结肠癌组织Gli-1、ZEB2蛋白表达升高，并可能促进结肠癌的发生、发展。但本研究未对两者行mRNA及DNA水平检测，未能证实两者是否为组成型激活。

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张晓伟(E-mail: 17837203@qq.com)

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2016-09-28)