从Agilent 1100到ACQUITY Arc

盐酸甲氧氯普胺及相关物质分析的HPLC方法转换

本文将盐酸甲氧氯普胺相关物质分析的HPLC方法从Agilent 1100系统转换到ACQUITY®ArcTM系统，此系统成功重现了Agilent 1100 LC的色谱分离，获得了可靠、稳定且准确的结果。

用于测试制药原料和最终产品的分析方法常常需要在机构间转换，或者转换至使用不同供应商仪器的合同实验室。因此对于分析实验室来说，成功实现方法转换对于确保产品一致性和合规性来说至关重要。有效的方法转换能够让同一分析方法始终得出相当的结果，不受仪器、实验室或样品来源的影响。这对于免去昂贵且耗时的方法重复验证步骤来说也是非常重要。

本文介绍了从Agilent 1100系列LC系统到ACQUITY Arc系统的盐酸甲氧氯普胺相关物质分析的HPLC方法转换。是否成功实现方法转换的评判方法是通过检验色谱分离结果是否相似以及验证系统适应性结果是否符合USP通用章节〈621〉色谱法1中定义的要求。

图1.从Agilent 1100系列LC系统到ACQUITY Arc系统的方法转换中，含1.0%相关物质的0.5 mg/ml甲氧氯普胺API的色谱数据。

表1.梯度条件

表2.方法转换中USP指定的盐酸甲氧氯普胺相关物质的列表

实验部分

仪器和试剂

LC 系统：配备四元泵和DAD检测器的Agilent 1100系列LC系统配备2998 PDA和ACQUITY QDa检测器、被动预加热器以及流路1的ACQUITY Arc系统。

色 谱 柱： XSelectTMCSH C18，4.6×150 mm，5 µm；柱温：45℃；流速：2.9 ml/min；进样体积：10.0μl；流动相：A：0.1%甲酸水溶液，B：0.1%甲酸的甲醇溶液；清洗专用冲洗液：水/甲醇（50：50），样品清洗液：50：50，水/甲醇；密封清洗液：水/乙腈（90：10）；PDA检测条件：λ范围：210～400 nm，提取270 nm的谱图；采样速率：20 pt/ s；质谱检测：ACQUITY QDa检测器(仅ACQUITY Arc系统)；电离模式：ESI+、ESI-；采集范围：100～440 m/z。

图2.通过质谱检测，使用ACQUITY QDa检测器获得的质谱数据确证峰。Empower 3软件的质谱分析窗口显示了单个结果的UV和质谱数据。

表3. 针对Agilent 1100 系列 LC系统和ACQUITY Arc系统间的方法转换，使用系统适应性溶液重复进样五次得到的系统适应性结果

结果与分析

本研究中使用的盐酸甲氧氯普胺的相关化合物列于表2。分离储液使用甲醇配制，浓度为1.0 mg/ml。用水将甲氧氯普胺储液稀释至0.5 mg/ml，相关物质的加标量为1.0%。系统适应性测试制备溶液将各种储液均移至一个样品瓶中，用水稀释，使每种分析物的浓度均为0.05 mg/ml。然后使用标准稀释液(50：50,甲醇/水)将混合溶液稀释至15 µg/ ml，以进行系统适应性测定。

首先在Agilent 1100系列LC系统上运行HPLC方法，然后转换至ACQUITY Arc系统。ACQUITY Arc系统采用了新型Multi-flow pathTM技术，该技术可高效转换使用上一代LC仪器开发的传统方法，用于HPLC方法转换的仪器条件见上文。

Agilent 1100系 列 LC系 统 和ACQUITY Arc系统得到的样品(含0.5 mg/ml的甲氧氯普胺API和1.0%相关物质)色谱数据如图1所示。数据表明，ACQUITY Arc系统重现了Agilent 1100系列LC系统的色谱分离。采用质谱检测的方法，使用与ACQUITY Arc系统联用的ACQUITY QDa检测器得到的质谱数据确证甲氧氯普胺及其相关物质的鉴定结果。Empower®3软件的质谱分析窗口(图2)展示了单个结果的UV和质谱数据。辅以质谱数据的UV检测可快速确证样品组分。

ACQUITY Arc系统上HPLC方法的性能表现是根据USP通用章节〈621〉色谱法1中的要求使用系统适应性溶液重复进样五次所得的系统适应性结果进行评判，同时按此要求与Agilent1100系列LC系统所得的实验结果进行比对。

两个系统所得的系统适应性结果均符合USP规定，结果汇总于表3。在ACQUITY Arc系统上运行方法时的保留时间和峰面积重复性良好，RSD远低于小于2.0%的USP规定，并且与Agilent 1100系列LC系统相当。两个系统的结果中所有峰之间的USP分离度值相当，表明方法转换时无分离度损失。USP峰拖尾因子也相当。

得益于独有的Multi-fow path技术，ACQUITY Arc系统能够从各种平台轻松接受并重现方法且无需折中方法完整性。ACQUITY Arc系统具有强大的LC性能，能够通过整合诸如ACQUITY QDa检测器和Empower色谱数据系统(CDS)软件等新技术来保障实验室投资。

小结

本文证明从Agilent 1100系列LC系统转换到了ACQUITY Arc系统，能 够成功重现Agilent1100系列LC系统的 色谱分离水平，并且其系统适应性符合USP规定。满足系统适应性要求对于确 保实验室始终符合良好实验室规范来说 至关重要。此外,与UV检测配合使用 的ACQUITY QDa检测器能够通过质谱 检测快速确证峰。 LP

本文资料由沃特世公司提供。