余璞龙海霍金龙王强李自安王金祥刘菊芬潘兴华庞荣清

·论著·

体外传代对版纳微型猪骨髓间充质干细胞绿色荧光蛋白表达的影响

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目的 通过分离扩增版纳微型猪骨髓间充质干细胞（BMSCs）观察传代对慢病毒转染的绿色荧光蛋白（GFP）表达的影响。方法 采集4月龄版纳微型猪的骨髓，在DMEM/F12培养液中分离间充质干细胞（MSCs），并根据其形态学、抗原标志表达和分化潜能给予鉴定。MSCs与GFP慢病毒载体共培养，荧光显微镜观察GFP的表达，流式细胞仪检测传代后MSCs GFP表达率的变化。标记后传代至1、2、3、4代细胞间比较用非参数检验。结果 采用直接培养骨髓，可以分离到高表达CD13、CD29、CD90、CD105 的MSCs，并可诱导分化为脂肪、骨和软骨细胞。MSCs与携带GFP的慢病毒载体共培养3天即可观察到GFP的表达，最佳转染复数（MOI）值为50，最佳共培养时间为6 d。传代后 MSCs GFP表达率呈下降趋势[1代转染率（42.3±2.25）％、2代转染率（41.6±2.65）％、3代转染率（41.4±3.75）％和 4 代转染率（38.2± 4.75）％]，但传至 4 代GFP表达率的变化差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。结论 采用含有10％胎牛血清的DMEM/F12培养液可以从版纳微型猪骨髓中分离到MSCs，GFP慢病毒转染是标记MSCs的有效方法，连续传代4代不会显著影响GFP的表达。

猪； 骨髓； 间质干细胞； 细胞培养技术； 生物学标记

版纳微型猪近交系（banna minipig inbred line，BMI）是云南农业大学曾养志教授领导的科研小组精心培育的大型哺乳类医学实验动物，具有遗传背景清楚、个体相似度高的特点，是十分珍稀的医学科学实验研究模型[1-3]，近交系来源的细胞也是体外实验研究的珍稀材料。……