敖 静，桓明辉，李 杨，刘晓辉，高晓梅，徐 冲

(辽宁省微生物科学研究院,辽宁 朝阳 122000)



1株耐高温产蛋白酶细菌的筛选鉴定及其液体发酵条件的优化

敖 静，桓明辉，李 杨，刘晓辉，高晓梅，徐 冲

(辽宁省微生物科学研究院,辽宁 朝阳 122000)

为高效发酵鸡粪，在鸡粪发酵高温时期(≥50 ℃)筛选到11株菌株，确定其中1株高温细菌GX7具有较高的蛋白酶活力。经16S rDNA测序并进行同源性比较可知，GX7与枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的16S rDNA 序列相似性达到100%；通过构建系统发育进化树，结合生理生化试验，鉴定GX7为枯草芽孢杆菌。通过绘制细菌生长曲线、测定细菌蛋白酶活力可知，细菌GX7的蛋白酶活力与菌数呈强正相关。从发酵培养基的组成及菌株的培养条件等方面优化枯草芽孢杆菌GX7产蛋白酶的条件，结果显示，最优培养基配方为：酵母浸膏1.5%、玉米粉1.5%、MgSO40.5%；最优培养条件为：pH值8.1、培养温度37 ℃、接菌量2%、装液量50 mL(250 mL)、摇床转速140 r/min。在此条件下，活菌数提高1个数量级，达到2.56×109cfu/mL，蛋白酶活力提高约3倍，为26 U/mL。

耐高温; 蛋白酶; 细菌; 鉴定; 发酵条件优化

随着畜禽养殖业的不断发展，畜禽粪便的产量也急剧增加。据统计，我国畜禽粪便的年总量高达20亿t，是工业废弃物的3.2倍[1]。利用微生物菌剂进行堆肥发酵是将畜禽粪便无害化处理的最有效手段之一。堆肥发酵是微生物通过代谢繁殖将有机质分解转化为无机态养分的过程，通过添加外源微生物能大幅度提高堆肥腐熟的速度和效果[2]。近年来，我国学者在利用微生物发酵堆肥方面进行了大量研究，其中，石春芝等[3]用鸡粪、猪粪和稻壳混合堆肥，通过添加0.5%的快速发酵菌剂，显著缩短了发酵时间，堆制14～21 d即达到有机肥料标准；……