刘 媛，李学伍，王 丽，谷 雨，王林建

(1.河南科技大学 动物科技学院，河南 洛阳 471023； 2.河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室，河南 郑州 450002； 3.河南农业大学 生物工程学院，河南 郑州 450002)



鸡4种主要RNA病毒病多重感染复合PCR检测方法的建立

刘 媛1，李学伍2，王 丽2，谷 雨3，王林建3

(1.河南科技大学 动物科技学院，河南 洛阳 471023； 2.河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室，河南 郑州 450002； 3.河南农业大学 生物工程学院，河南 郑州 450002)

依据GenBank中注册的禽流感病毒(AIV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、新城疫病毒(NDV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)基因组核苷酸序列，通过序列比对获得AIV、IBV、NDV、IBDV的相对保守序列。根据每种病毒的保守序列利用生物学软件分别设计3对特异性引物，4种病毒共设计12对引物，并对12对引物进行模拟筛选，获得匹配最佳的4对引物。对获得的最佳匹配引物进行单项PCR验证，优化复合PCR反应条件，确定最佳的退火温度、引物浓度和TaqDNA聚合酶使用量；经特异性、敏感性及简化PCR试验，最终建立了简易复合PCR检测方法。结果表明，建立的检测方法可同时扩增出4条大小与设计相符的特异性片段，即IBV(146 bp)、NDV(215 bp)、IBDV(345 bp)、AIV(435 bp)；建立的复合PCR方法具有较强的敏感性和特异性，能检测出100 pg AIV、IBV、IBDV的cDNA和100 fg NDV的cDNA；将三温热循环改进为二温热循环，即将退火和延伸过程合为一步(62 ℃)，大大缩短了反应时间。

禽流感病毒； 鸡传染性支气管炎病毒； 新城疫病毒； 传染性法氏囊病毒； RNA病毒； 复合PCR

禽流感(avian influenza，AI)、鸡传染性支气管炎(infectious bronchitis，IB)、新城疫(Newcastle di-sease，ND)和传染性法氏囊病(infectious bursal di-sease，IBD)是鸡常见的重要RNA病毒病。其中，禽流感……